Actividad quitinasa de Purpureocillium lilacinum en medio solido

GORTARI, M.C.; GALARZA, B.; HOURS, R.A.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argetnino de Micologia. XXIII Jornadas Argentinas de Micologia; 2014

Asociación Micologica Carlos Spegazzini

ACTIVIDAD QUITINASA DE PURPUREOCILLIUM LILACINUM EN MEDIO SOLIDO Gortari, M1,2, Galarza, B1, Hours, R2 1Comisión de Investigaciones Científicas de la Provincia de Buenos Aires (CIC-PBA). 2Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI; UNLP, CONICET-La Plata). Facultad de Ciencias Exactas, UNLP. 47 y 115 (B1900ASH) La Plata. Purpureocillium lilacinum (Thom) Luangsa-Ard et al. es un hongo nematofago con actividad antagónica in vitro sobre huevos de nematodos. Entre sus factores de patogenicidad se encuentran las quitinasas vinculadas al proceso de infección de los huevos. Su capacidad para difundir a través del agar ha permitido el desarrollo de ensayos de screening de hongos quitinolíticos o la evaluación cualitativa de quitinasas provenientes de extractos fúngicos, ambos basados en el monitoreo de la degradación de la quitina incorporada al medio agarizado. Estos ensayos constituyen un método simple y económico para la evaluación de la actividad quitinolitica que se manifiesta por la aparición de halos o zonas más claras alrededor de las colonias o extractos fúngicos. Su visualización puede facilitarse por medio de la utilización de sustancias reveladoras al medio de cultivo. El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de los colorantes Rojo Congo y púrpura de bromocresol para revelar la actividad quitinolitica de cultivos de tres aislamientos de P. lilacinum sobre agar quitina swollen. El Rojo Congo, a una concentración final igual a 1% (p/v), fue utilizado incorporado al medio de cultivo y como solución para teñir las placas al final del periodo de cultivo. El púrpura de bromocresol fue incorporado al medio ajustando a pH 4,7 (color amarillo). Los medios estériles fueron colocados en placas de Petri e inoculados por puntura con P. lilacinum. Las placas inoculadas fueron incubadas a 30°C durante aproximadamente 10 días. En ambos casos se obtuvieron resultados positivos. La actividad quitinasa revelada con Rojo Congo produjo un halo claro alrededor de las colonias mientras que el revelado con púrpura de Bromocresol produjo un halo de color violeta intenso como resultado del cambio de pH que resulta de la degradación de la quitina. Los dos colorantes resultaron aptos para una mejor visualización de la actividad quitinasa.