La yerba mate: un importante inductor de la actividad clorogenato hidrolasa.

BUTIUK, A.P.; HOURS, R.A.; ADACHI, O.

La Plata

Encuentro; V Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2012

Sociedad Argentina de Biocatálisis y Biotranformaciones

La yerba mate: un importante inductor de la actividad clorogenato hidrolasa.   Ana P. Butiuk(1), Roque A. Hours(1), Osao Adachi(2) butiuk@biotec.org.ar (1) Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI; UNLP, CONICET La Plata). Fac. de Cs. Exactas, UNLP. 47 y 115, (B1900ASH) La Plata, Argentina (2) Laboratory of Applied Microbiology, Department of Biological Chemistry, Faculty of Agriculture, Yamaguchi University, Yamaguchi 753-8515, Japan   La clorogenato hidrolasa (CHasa, EC 3.1.1.42) es la enzima que cataliza la hidrólisis del ácido clorogénico (ACG), liberando cantidades equimolares de ácidos quínico (AQ) y cafeico (AC). Es una enzima inducible producida por diferentes especies de Aspergillus cultivados en medios suplementados con materiales vegetales ricos en ACG [1]. Se ha reportado que los niveles de ACG en yerba mate (Ilex paraguarienses A. St. Hil) son muy altos, tal vez los mayores de cualquier vegetal (10% base seca) [2]. El objetivo del presente trabajo fue analizar la producción de CHasa por varias cepas fúngicas utilizando materiales derivados de la yerba mate (de diferentes etapas del procesamiento) como inductores de la actividad enzimática. Se cultivaron diferentes cepas fúngicas (A. niger IFO 3302, A. sojae IFO 3312, A. kawachii IFO 4308 y una cepa silvestre aislada de yerba mate) en medio Czapek modificado, al cual se le adicionó 0,5% (p/v) de extracto acuoso concentrado de yerba mate (EYM) al final de la etapa exponencial de crecimiento. El micelio fue separado, lavado y desintegrado en buffer fosfato de sodio (NPB, pH: 6,5). La suspensión resultante fue centrifugada y el sobrenadante obtenido fue utilizado como fuente de CHasa. La actividad CHasa se evaluó semi-cuantitativamente por TLC utilizando ACG (Sigma) como patrón. La desaparición del ACG y la aparición de AC fueron examinadas bajo luz UV. Además, se evaluaron diferentes materiales derivados del procesamiento de la yerba mate como inductores en diferentes concentraciones: mate cocido instantáneo sin malto dextrina (-MD) y con malto dextrina (+MD), polvo de yerba mate (PD, residuo de la elaboración de yerba mate) y EYM (todos provistos por La Cachuera S.A., Argentina). Todas las cepas fúngicas ensayadas presentaron actividad CHasa. Sin embargo, se seleccionó A. niger por presentar las manchas más intensas de AC en el TLC con las concomitantes reducciones en ACG. Los ensayos con diferentes cantidades de los inductores antes mencionados revelaron que las mayores actividades de CHasa correspondieron al agregado de 0,125% EYM y 1% ?MD bajo las condiciones estudiadas. Un agregado de EYM mayor al 1% resultó en la inhibición de la actividad enzimática. No se detectó actividad CHasa en el micelio crecido en ausencia de inductor. Los presentes resultados confirmaron que la yerba mate es un potente inductor de la actividad de CHasa fúngica. Bibliografía 1. Adachi, O.; Ano, Y.; Akakabe, Y.; Shinagawa, E.; Matsushita, K. Appl. Microbiol. Biotech. 2008, 81, 143-151. 2. Marques, V.; Farah, A. Food Chem. 2009, 113, 1370-1376.