Caracterización de una poligalacturonasa producida por Pichia anomala (BIOT P007)

MARTOS, M.A.; ROJAS, N.L.; BUTIUK, A.P.; ZUBRESKI, E.R.; HOURS, R.A.

Posadas, Misiones

Congreso; XII Congreso Argentino de Micología; 2011

Asociación Argentina de Micología

biot     CARACTERIZACIÓN de una POLIGALACTURONASA producida por Pichia anomala   Martos María A. (1), Rojas Natalia L. (2), Butiuk Ana P. (1), Zubreski Emilce R. (1), Hours Roque A. (2) (1) Facultad de Ciencias Exactas Químicas y Naturales (FCEQyN). UNaM. Félix de Azara 1552. (3300) Posadas, Misiones, Argentina. (2) Centro de Investigación y Desarrollo en Fermentaciones Industriales (CINDEFI). UNLP; CCT-La Plata, CONICET amartos@arnet.com.ar   Palabras claves: Pichia anomala, poligalacturonasa, caracterización   Las protopectinasas (PPasas) son un grupo heterogéneo de enzimas, capaces de liberar pectina soluble de alto PM a partir de protopectina de tejidos vegetales. En estudios previos se ha purificado una poligalacturonasa con actividad PPasa, producida en medio líquido por Pichia anomala, una levadura aislada de cáscaras de frutas cítricas en la provincia de Misiones (Argentina). El objetivo del presente trabajo fue realizar la caracterización bioquímica de la enzima poligalacturonasa (PG) producida por P. anomala. El extracto enzimático se obtuvo a partir de cultivos de P. anomala desarrollados a escala de frascos agitados (180 rpm, 30 ºC) durante 10 h, en un medio de cultivo compuesto por Yeast Nitrogen Base, glucosa y pectina de citrus. Para el proceso de purificación, el extracto enzimático fue dializado y luego sometido a una cromatografía de intercambio catiónico. El peso molecular de la enzima purificada se determinó por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). El pH óptimo de actividad PG fue determinado midiendo la actividad enzimática en el rango de pH entre 2,6 y 7. El efecto del pH y la temperatura sobre la estabilidad de la enzima se determinaron por preincubación de la enzima en ausencia de sustrato, a diferentes valores de pH (2,6 a 7) y temperaturas (37 a 55 ºC) y posterior determinación de la actividad enzimática residual. Los parámetros cinéticos Vmáx y Km fueron determinados a partir de medidas de velocidad inicial empleando ácido poligalacturónico como sustrato en un rango de concentraciones de 0,05 a 2,5 g/l, al pH óptimo y a 37 °C. Se determinó el efecto de ciertos cationes, tales como Cu+2, Ca+2, Fe+3, K+, Mg+2, Mn+2 y Zn+2, sobre la actividad enzimática. La capacidad macerante de la enzima PG, se determinó por evaluación de pérdida de coherencia de tejidos de papa, por medio del agregado de la enzima pura. La enzima purificada con actividad PG, presentó un peso molecular de aproximadamente 43 kDa. Los valores de Vmax y Km obtenidos fueron de 0,259 mmol/l.min y 1,73 mg/ml, respectivamente. PG exhibió máxima actividad a pH 4,2, fue estable en un rango de pH entre 3,5 - 5,5 y hasta 49 ºC durante 10 h. Los cationes que produjeron una disminución de la actividad PG fueron K+ y Ca+2. Se observó ablandamiento de los tejidos de papa al utilizar la enzima purificada, confirmándose de este modo la actividad PPasa de la enzima. La enzima mostró características interesantes tales como máxima actividad a valores ácidos de pH y alta estabilidad en un amplio rango de pH y temperaturas. Estas propiedades sugieren su potencial aplicación en industrias de alimentos, principalmente en el procesamiento de frutas y vegetales, considerando  la naturaleza ácida de los mismos.