Efectos de una mezcla microbiana constituida por microorganismos aislados de kéfir sobre la invasión de Shigella sonnei y Shigella flexneri en células Hep-2

BOLLA P.; FERNANDEZ M; KAKISU E.; DE URRAZA P.J; DE ANTONI G.L

Urugauay

Congreso; congreso internacional de microbiología ALAM; 2010

ALAM

Shigella es causante de la disentería bacilar en humanos mediante la invasión de células del epitelio intestinal, provocando cuadros diarreicos que pueden poner en riesgo la salud. En nuestro país las especies más frecuentemente encontradas son S. flexneri y S. sonnei. En los últimos años el uso de probióticos ha sido  ampliamente utilizado para prevenir una variedad de enfermedades infecciosas causadas por patógenos entéricos. El Kefir es un producto fermentado, la leche es fermenta por una microflora mixta confinada a una matriz de gránulos de kéfir discretos. Levaduras y bacterias ácido lácticas coexisten en una asociación simbiótica y son responsables de la fermentación ácido-alcohólica. Estos microorganismos probióticos, principalmente bacterias ácido lácticas (BAL) y levaduras previenen la adhesión, el establecimiento y la invasión de enteropatógenos específicos. En este trabajo se propone estudiar la capacidad de una mezcla microbiana(MM) constituida por bacterias y levaduras aisladas de Kefir de disminuir la invasión de Shigella flexneri y Shigella sonnei sobre células Hep-2. Para analizar el efecto protector sobre la invasión de Shigella, las células Hep-2 se pre-incubaron durante una hora con una MM que contiene Lactobacillus plantarum CIDCA 83114, L. kefir CIDCA 8348 y Lactococcus lactis CIDCA8221 en concentraciones de 109 ufc / ml y dos levaduras Saccharomyces cerevisiae CIDCA 8112 y Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154 en concentraciones de 106 ufc / ml.  Después de lavar la monocapa de células, se incubaron durante dos horas con Shigella. sonnei o Shigella. flexneri  en concentración 108 ufc/ml. Se determina la invasión mediante recuento en placa. También se realizó microscopía electrónica con el fin de estudiar tanto la presencia de ruffles como la desorganización del citoesqueleto en Hep-2. Hemos podido observar una disminución de 2 órdenes en la capacidad invasiva de S. sonnei, mientras que en el caso de S. flexneri se encontró una disminución de más de 4 órdenes. La microscopía electrónica demostró una gran desorganización del citoesqueleto indicando daño celular, como así también la presencia de filopodios cuando la monacapa de Hep-2 fue incubada con Shigella sonnei o Shigella flexneri. Por el contrario, cuando las células fueron pre-incubadas con la MM no se observaron estas prolongaciones ni daño celular. En conclusión, se observó que MM tiene un papel protector contra la invasión de Shigella, siendo más importantes para el aislado de S. flexneri.