ACTIVIDAD ANTITUMORAL Y ANTITROMBÓTICA DE PROTEÍNAS DE AMARANTO MODIFICADAS POR HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA

SABBIONE, A.C; BARRIO, D.A; SCILINGO, A.A; AÑON, M.C

Santa Fe

Congreso; XVIII Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2010

Los péptidos bioactivos se definen como “fragmentos proteicos exógenos específicos que producen un impacto positivo en las funciones del cuerpo humano generando un efecto benéfico sobre la salud independientemente del nutricional”. Para ser “bioactivo” un componente dietario debe impartir efectos biológicos mesurables a un nivel fisiológicamente razonable. La “bioactividad” medida debe tener al menos el potencial suficiente para afectar la salud de una manera benéfica, excluyendo posibles efectos dañinos como por ejemplo toxicidad, alergenicidad y mutagenicidad. Se han identificado péptidos bioactivos diferentes alimentos, siendo las proteínas de la leche y sus derivados, los precursores más frecuentes, pero encontrándose también en otras proteínas alimentarias, huevo, pescado, arroz, soja, trigo, carne. Se ha visto que las proteínas y péptidos de semillas de amaranto presentan actividades biológicas deseables tales como antimicrobianas, antihipertensivas y antiproliferativas. Para generar mayor conocimiento acerca de las mismas se estudió la actividad antitumoral y antitrombótica de aislados e hidrolizados proteicos de amaranto. En el presente trabajo se utilizaron semillas de Amaranthus mantegazzianus. El aislado se preparó a partir de la harina desgrasada con hexano. El hidrolizado proteico se obtuvo empleando alcalasa (1,71U Anson/g sólido; 0,08 µl/mg de aislado, 20 min, 37ºC) y tripsina (10600 U BAEE/mg sólido; 0,01 mg/mg de aislado, 20 min, 37ºC). La reacción se detuvo calentando la mezcla de reacción (85ºC, 10 min). Se determinó la composición de aislado y su hidrolizado: proteínas (Kjeldahl), hidratos de carbono (antrona), humedad (método indirecto) y cenizas (calcinación). El grado de hidrólisis se obtuvo con el método del TNBS. Las muestras se caracterizaron mediante electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente reductor, cromatografía de exclusión molecular y calorimetría diferencial de barrido. Para determinar la potencial actividad antitumoral se utilizaron células de origen tumoral (UMR106) obtenidas a partir de un osteosarcoma de rata. El aislado y su hidrolizado proteico se solubilizaron en medio de cultivo DMEM y se adicionaron al cultivo en diferentes concentraciones (0-5 mg/ml). El número de células viables se determinó empleando el bioensayo del cristal violeta (Okajima yt col., 1992) y a partir del mismo se determinó la inhibición de la proliferación de células tumorales. Para determinar la actividad antitrombótica in vitro se utilizó el método de microplacas (Yang y col., 2006; Zhang y col., 2007) que consiste en adicionar a cada pocillo fibrinógeno 0,1% junto con la muestra estudiada y trombina 12UI/ml para iniciar la coagulación. A los 0 minutos y luego de 10 minutos de incubación a 37°C se midió la absorbancia a 405nm para obtener los %Inhibición de la coagulación de las muestras y los controles. Se pudo observar que la hidrólisis del aislado proteico de amaranto genera polipéptidos de menor masa molecular que los hallados en las muestras sin tratamiento enzimático, y provoca la pérdida de estructura de las proteínas de amaranto. Los resultados además sugieren que en los aislados proteicos de amaranto se encontrarían presentes péptidos con actividad citomoduladora y antitrombótica, cuya potencia aumenta con la hidrólisis.