Estudio de la esporulación y la sensibilidad a factores luminales intestinales en Clostridium difficile

FERNANDO M. TREJO; PAOLA CECILIA SOLDAVINI PELICHOTTI; PABLO F. PÉREZ

CABA

Congreso; VIII Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica (SADEBAC); 2018

SADEBAC - AAM

Clostridium difficile es un patógeno anaerobio estricto esporulado que se establece ydesarrolla en el colon del hospedador provocando desde diarreas hasta colitispseudomembranosa, asociado principalmente a las toxinas A y B producidas por las célulasvegetativas. Las esporas son su forma de diseminación y contagio. En el hospedador, C. difficilese encuentra con factores luminales tales como sales biliares, cuyo efecto sobre la bacteria serdeterminante en la infección. El objetivo del este trabajo fue estudiar la esporulación y elcrecimiento de C. difficile en presencia de ácido ursodeoxicólico (UDCA) o bilis de buey.Se evaluaron tres aislamientos clínicos locales ALCD3, GCD2 y GCD4 y la cepa de referencia VPI10463. Efecto de sales biliares: C. difficile fue inoculado en BHI en presencia o no de diferentesconcentraciones de bilis o UDCA e incubadas en anaerobiosis a 37°C. El desarrollo de loscultivos se evaluó por medida de DO (600nm) a las 22 h. Esporulación: se evaluó pormicroscopia óptica a partir de cultivos de C. difficile en DCM a diferentes tiempos decrecimiento, observándose esporos oscuro (O), brillantes (B) y libres (L). El resultado seexpresó como relación (R) de forma evaluada/formas totales (ej. RO para esporos oscuros).Termorresistencia por recuento en DCM-agar-tauroclato de sodio (0.1% p/v), de suspensionesbacterianas sin tratar o tratadas térmicamente (20 min. a 65ºC). El resultado se expresó comoTR: relación formas termo-resistentes/formas totales.El crecimiento de C. difficile (DO a 22 h de incubación) fue inhibido significativamente respectoal control, en un 36% (ALCD3 y GCD2), 65% (VPI 10463) y 92% (GCD4) en por UDCA 1 mM. Paratodas las cepas la inhibición fluctuó entre 90-95% con UDCA 4 mM. En presencia de bilis, al0.1% p/v, el crecimiento fue inhibido significativamente respecto al control en un 56% (ALCD3)y 60% (GCD2). A concentración de 2% p/v, la inhibición fue de 38% (ALCD3) y 96% (GCD2).Las cepas mostraron tener parámetros de crecimiento similares entre sí, con tiempos deduplicación de 1 h y latencia entre 1 y 4 h, llegando a fase estacionaria entre las 10-12 h. A 24 hde crecimiento se detectaron formas esporuladas en estadíos tempranos (O) con RO: 0,25 (VPI10463), 0,70 (ALCD3) y 0,83 (GCD4). La cepa ALCD3 además presentó formas brillantes RB:0,25. A los 7 días, se detectaron RL: 0,02 (VPI 10463), RL: 0,80 (ALCD3), RL: 0,79 (GCD2) yRL:0,14 (GCD4). Luego de 24 h de crecimiento se observaron diferencias en TR, con valores de0,27 (ALCD3), 0,07 (GCD4),