CIDCA   05380
CENTRO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO EN CRIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Detección de estirpes de Microcystis aeruginosa potencialmente tóxicas en el Río de la Plata, mediante amplificación simultanea de regiones mcy
Autor/es:
OTEIZA, JM; OUAHID, Y; BARON, A; ANDRINOLO, D; ECHENIQUE, R; GIANNUZZI, L.; ZARITZKY, N; Y FERNÁNDEZ DEL CAMPO,
Lugar:
Punta del este, Uruguay
Reunión:
Congreso; Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de los Alimentos (X COLMIC); 2009
Resumen:
<!-- /* Font Definitions */ @font-face {font-family:"Cambria Math"; panose-1:2 4 5 3 5 4 6 3 2 4; mso-font-charset:0; mso-generic-font-family:roman; mso-font-pitch:variable; mso-font-signature:-1610611985 1107304683 0 0 159 0;} /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-unhide:no; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman","serif"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:ES; mso-fareast-language:ES;} .MsoChpDefault {mso-style-type:export-only; mso-default-props:yes; font-size:10.0pt; mso-ansi-font-size:10.0pt; mso-bidi-font-size:10.0pt;} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:4.0cm 3.0cm 3.0cm 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> Las Cianobacterias, son bacterias gram-negativas, foto-autotróficas de amplia distribución geográfica que bajo condiciones ambientales apropiadas, pueden desarrollarse masivamente dando lugar a formaciones típicas conocidas como florecimientos (o blooms). Estos, resultan muy peligrosos ya que varios géneros de cianobacterias producen toxinas responsables, en varios episodios, de la muerte de vertebrados. Las toxinas mayormente detectadas a nivel mundial son las microcistinas (MCs), hepatotoxinas, producidas por cianobacterias del género Microcystis spp. entre otros. Los objetivos del trabajo fueron: i) Detectar e identificar las principales especies de cianobacterias potencialmente tóxicas presentes en el Rio de La Plata, ii) Identificar estirpes del Género Microcystis potencialmente productoras de MCs y iii) Confirmar la presencia de MCs en las muestras de agua. Los ensayos se llevaron a cabo a partir de muestras provenientes del Río de La Plata (n=25, B1 al B25) colectadas durante los meses de diciembre de 2006 a marzo de 2007, con una frecuencia semanal. Los muestreos se realizaron en 2 estaciones fijas denominadas: Costa y Espigón. La estación Costa, corresponde al punto de ingreso del agua a la planta de tratamiento. La estación Espigón, se sitúa al finalizar el muelle donde se encuentran los pescadores. Las muestras de fitoplancton para análisis cualitativo se tomaron con red de plancton y para análisis cuantitativos, con botella del tipo Van Dorn. Se realizó la identificación de cianobacterias mediante el empleo de un microscopio invertido. La detección molecular de Microcystis spp. se basó en la detección de genes mcy (codificadores del complejo enzimático responsable de la síntesis de MCs, la microcistina sintetasa). Para ello, se procedió a la amplificación simultánea, por PCR, de fragmentos de los genes mcyC, D y G, empleando cebadores específicos y como molde el ADN total extraído de los florecimientos. Asimismo, para asegurar la presencia de cianobacterias en las muestras de agua, se procedió a la amplificación de la región intergénica de los genes cpcB y cpcA de la ficocianina (ficobiliproteína específica de las cianobacterias). La detección, identificación y cuantificación de las toxinas (MCs) se realizó mediante HPLC, con detector UV con arreglo de diodos y detector de fluorescencia. En todos los casos analizados, Microcystis resultó ser el género más abundante, mientras que la especia aeruginosa fue la de mayor prevalencia. Se obtuvieron valores de entre 10.000 y 460.000 cel.ml-1. Todas las muestras analizadas contenían cianobacterias (B1 al B25). En cuanto a la detección simultánea de genes mcy, en 23 de las 25 muestras se obtuvo alguno de los amplicones esperados, lo que estaría indicando la presencia de Microcystis potencialmente tóxicas. En varias de las muestras estudiadas, no se observó la presencia de los tres productos de amplificación esperados. En algunos casos se obtuvieron solamente los amplicónes correspondiente a los genes mcyD y mcyC (B4); mcyD (B11), o mcyC (B21) lo que indicaría, que la utilización de un solo par de cebadores para la detección de genes mcy como marcador de toxigenicidad no sería adecuado para realizar un monitoreo de cianobacterias potencialmente productoras de microcistinas; de ahí la utilidad de la detección simultanea de al menos 3 regiones mcy, mediante PCR multiplex. Asimismo los cromatogramas obtenidos por HPLC revelaron en 23 de las 25 muestras analizadas, la presencia de distintos tipos de MCs (siendo las principales la MCLR, MCYR y MCRR). La identificación de secuencias de genes mcy resulta ser una metodología útil y aplicable para conocer con la máxima antelación posible el carácter toxicogénico de las cianobacterias presentes en cuerpos de agua. Los resultados obtenidos constituyen el primer estudio de detección de cianobacterias del género Microcystis, potencialmente tóxicas, mediante la aplicación de una herramienta molecular aplicable directamente a muestras de agua del Río de la Plata.