Clonado de las secuencias codificantes para las zonas variables de las cadena pesada y liviana del anticuerpo monoclonal anti-gliadinas y su expresión en E. coli.

SCABONE, CAMILA MARIA; PETRUCCELLI, SILVANA

Rosario

Congreso; REDBIO 2009 VII Simposio Nacional de Biotecnología y “II Congreso Internacional-REDBIO-Argentina; 2009

REDBIO-FAO

La enfermedad celiaca es producida por exposición a proteínas del gluten de trigo, cebada y centeno siendo el único tratamiento la ingesta de alimentos libres de estas proteínas. Debido a que cantidades muy reducidas de estas proteínas son capaces de producir inflamación, la certificación de alimentos para celiaco requiere de métodos de alta sensibilidad. El objetivo del presente trabajo fue el clonado de las zonas variables de las cadenas pesadas y livianas del anticuerpo monoclonal especifico contra gliadina 1B4E9 y su expresión en E. coli. La metodología del clonado se baso en la extracción de RNA de células del hibridoma 1B4E9 empleando RNeasy Kit (Qiagen). La obtención de cDNA fue mediante la  utilización de la enzima retrotranscriptasa Superscript III (Invitrogen) y primers específicos reverse diseñados sobre las regiones constantes CL y CH1. La amplificación de los genes codificantes para la cadena liviana (VL-CL) y de la cadena pesada (VH-CH1), se realizo utilizando un set de primers descriptos para genes de immunoglobulinas de ratón. Los productos de PCR fueron clonados en el pComb 3H y secuenciados. Con dicha secuencia y mediante la utilización del servidor IMGT, se predijeron los clones que consistían en una inmunoglobulina de arreglo funcional. Luego, se subclono en el pComb3X y se puso a punto la expresión del Fab anti-gliadina humanizado. Los resultados de los inmunoensayos revelo la capacidad del anticuerpo de reconocer el antígeno.