Inhibidores peptídicos de HMG-CoA reductasa de amaranto

AÑÓN M. CRISTINA; NARDO AGUSTINA E.

Mar del Plata

Congreso; Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos 7º Simposio Internacional de Nuevas Tecnologías, V Simposio Latinoamericano sobre Higiene y Calidad de Alimentos y 3º Simposio de Innovación en Industrias Alimentarias.; 2017

Asociación Argentina de Tecnólogos Alimentarios - AATA

Las proteínas de las semillas de amaranto han sido objeto de estudio de nuestro grupo de investigación por varios años y hemos podido demostrar que las mismas son fuente de péptidos con actividad antioxidante, antitrombótica, antihipertensivos e inmunomoduladores. Sin embargo, a pesar de la importante información acumulada relacionada con las actividades asociadas a la fracción proteica de este psudoceral, se ha indagado poco sobre su acción sobre la producción de colesterol. En este marco, el objetivo general de este trabajo fue detectar la presencia de posibles inhibidores peptídicos en amaranto de la enzima 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa (HMGR), enzima limitante de la vía biosintética del colesterol.Se preparó un aislado proteico (Ais) a partir de harina desgrasada obtenida de semillas de Amaranthus hypochondriacus (INDEAR, Rosario, Argentina) mediante extracción a pH 9 y precipitación isoeléctrica a pH 5. El aislado obtenido fue sometido a dos procesos de proteólisis. Para ello en el primer caso el Ais se hidrolizó por acción de alcalasa de Bacillus licheniformis (≥2.4 U/g; relación sólido:líquido 1:10) a pH 9 durante 6 h a 37°C (Hid). En el segundo proceso se simuló la digestión gastrointestinal (Dig) en tres etapas. Inicialmente el Ais se trató con fluido símil saliva (2,38 g/l Na2HPO4; 0.19 g/l KH2PO4; 0,3 g/l NaCl pH 6,8; α-amilasa 70 U/ml) durante 5 min; luego con fluido símil jugo gástrico (0,1g pepsina/g proteína, 1,75 g/l NaCl en 0,1 N HCl pH 2) durante 1 h, y finalmente con fluido símil jugo duodenal (0,1g pancreatina/g proteína en 0,1M NaHCO3, pH 7), durante 1 h. Todas la etapas se realizaron a 37°C con agitación. A las muestras obtenidas (Ais, Hid y Dig) se les determinó la concentración proteica (Kjeldahl), el grado de hidrólisis (GH) porcentual (OPA) y la distribución de péptidos mediante cromatografía FPLC de exclusión molecular y electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente reductor. El proceso de digestión gastrointestinal simulada (GH=44±2%) generó un mayor número de polipéptidos de menor tamaño que el proceso de hidrólisis con alcalasa (GH=25±3%).La actividad enzimática de HMGR se evaluó empleando un kit comercial (Sigma Aldrich) utilizando como buffer del ensayo buffer fosfato pH 7,4; 400 mM KCl. Las muestras fueron evaluadas en el rango de 10 a 100 µg de proteína/ml. Los resultados obtenidos indican que los polipéptidos y/o péptidos presentes tanto en el Ais como en el Hid y el Dig son capaces de inhibir la acción de la HMGR. Los valores de inhibición más altos fueron alcanzados por Ais (58% de inhibición) seguido por Hid (48% de inhibición). En las condiciones de ensayo empleadas las muestras de Ais e Hid no mostraron un comportamiento dosis-respuesta. En el caso del Dig, si bien se obtuvo una respuesta del porcentaje de inhibición con la concentración de muestra, este es contrario al esperado; dado que la inhibición se incrementa al reducirse la concentración de proteína de la muestra.