Péptidos derivados de la digestión gastrointestinal de proteínas de amaranto: Capacidad de neutralizar ROS intracelulares

GARCÍA FILLERÍA, S, TIRONI, V.

Valparaiso

Congreso; XI Congreso Iberoamericano de Ingeniería de Alimentos (CIBIA 2017); 2017

Universidad Federico Santa María - CIBIA

La incorporación de antioxidantes en la dieta puede prevenir los daños originados por las especies reactivas de oxígeno (ROS). En trabajos previos se identificaron diez péptidos derivados de la globulina 11S de amaranto por digestión gastrointestinal simulada, potencialmente capaces de neutralizar ROS: P1:TEVWDSNEQ, P2:IYIEQGNGITGM, P3:GDRFQDQHQ, P4:LAGKPQQEHSGEHQ, P5:YLAGKPQQEH, P6:LQAEQDDR, P7:HVIKPPSRA, P8:AWEEREQGSR, P9:AVNVDDPSK y P10: KFNRPETT. Mediante el ensayo ORAC (neutralización de peroxilos) se observó que P6, P9 y P10 no presentaron actividad y los 7 péptidos restantes fueron activos: P8>>P5≈P2≈P1>>P4>P7≈P3. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la capacidad de estos péptidos de neutralizar ROS a nivel intracelular. Se utilizaron células Caco2-TC7 (DMEM adhesión, incubación 37ºC, 5%CO2, confluencia); se agregó la sonda 2?,7?-diclorohidrofluoresceína diacetato (DCFH-DA 20 µM, incubación 30 min, oscuridad), se retiró la sonda, se agregó la muestra (incubación 1 h), se retiró la muestra, se lavó con PBS, se indujo el daño oxidativo con H2O2 (500 µM, incubación 1 h). DCFH-DA ingresa a las células y al oxidarse genera DCF fluorescente; se leyó la fluorescencia (exc:485 nm, em:528 nm) y se calculó el porcentaje de inhibición de ROS: (FC1-FM)/FC1*100, donde FC1: fluorescencia de C1 (control, PBS) y FM: fluorescencia con muestra. Los 10 péptidos (c=1 mg/mL) presentaron neutralización de ROS intracelulares, siendo el orden de actividad: P3≈P1 (50 % neutralización) >P5≈P6≈P2≈P10≈P4 (30-40 % neutralización) >P7≈P8≈P9 (25 % neutralización). Estos resultados muestran diferencias con el ensayo ORAC, lo cual podría estar relacionado con la capacidad de ingreso de los péptidos a la célula. Si bien algunos péptidos pueden ser efectivos en la neutralización de ROS en solución, no serán suficientemente activos intracelularmente, evidenciando la necesidad de estudiar los mecanismos de interacción y penetración de los péptidos con las células y la relación con sus secuencias y estructuras a fin de poder seleccionar las moléculas con mayor potencial antioxidante in vivo.