Estudio de la acción de Lactobacillus kefiri cepa CIDCA 8321 en la formación de biopelículas de cepas de Salmonella

LINA MERINO; MARINA GOLOWCZYC; FERNANDO TREJO; GRACIELA DE ANTONI

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de microbiología y XIV Congreso Argentino de microbiología; 2016

Asociación Latinoamericana de Microbiología y Asociación Argentina de Microbiología

Las biopelículas (biofilms) de microorganismos son estructuras complejas formadas por uno o más tipos de microorganismos que desarrollan asociados a una superficie. Se caracterizan por la excreción de una matriz polimérica que confiere a las bacterias mayor persistencia en el ambiente y mayor resistencia a agentes antimicrobianos.Algunas cepas de Salmonella, un patógeno asociado a numerosas enfermedades y contaminaciones, pueden formar biofilms, y propiedades de superficie como hidrofobicidad o agregación son relevantes en este proceso. Los probióticos pueden ser utilizados como una estrategia de control de los biofilms desarrollados por Salmonella.Los objetivos de este trabajo fueron 1) investigar la capacidad de formación de biofilm de 13 cepas de Salmonella entérica serovariedades Tiphymurium, Gallinarum y Enteritidis y 2) estudiar la acción de Lactobacillus kefiri cepa CIDCA 8321 sobre el desarrollo del biofilm de Salmonella.Se determinaron las propiedades de superficie de las cepas de Salmonella mediante ensayos de hidrofobicidad con hexadecano (método MATH), y de auto-agregación y co-agregación con el lactobacilo mediante cinética de caída de absorbancia a 600 nm.Se evaluó la formación de biofilm por cristal violeta (CV) y microscopía confocal. Para ello se crecieron  las cepas de Salmonella en medio LB en placas de policarbonato de 24 pocillos durante 24 hs a 37 ºC. Para los estudios de interacción, se evaluó la formación de biofilm en presencia de distintas concentraciones del lactobacilo (2x10⁸ UFC/m y diluciones 1/3 y 1/5 de esta suspensión). Posteriormente los biofilm fueron lavados y teñidos con solución de CV durante 20 min. El colorante se extrajo con etanol y se midió la absorbancia a 595 nm.Para estudiar la estructura, los biofilms fueron obtenidos por crecimiento sobre discos Thermanox manteniendo las mismas condiciones de ensayo mencionadas. Luego fueron teñidos con yoduro de propidio y SYTO 9, que además permite distinguir células vivas y muertas.Se observó que de las cepas de Salmonella evaluadas, dos serovariedad Enteritidis (CIDCA 101 y 105), una serovariedad Typhimurium (CIDCA102) y una serovariedad Gallinarum (CIDCA 109) tienen una alta capacidad de formar biofilm con valores de absorbancia mayores a 0,75. Además se observó que L. kefiri CIDCA 8321 disminuye la formación de biofilm de estas cepas y este efecto se ve aumentado en presencia de una mayor concentración de lactobacilos. Por microscopía se observó que la cepa de Salmonella CIDCA 105 forma estructuras tipo clusters que no se observan para la cepa CIDCA 101, mientras que en presencia del  lactobacilo estas formaciones están ausentes.Las cepas de Salmonella estudiadas son hidrofílicas y no autoagregan luego de 1 hora. L. kefir CIDCA 8321 es una cepa altamente hidrofóbica y tiene capacidad de co-agregar con Salmonella CIDCA 101, 102, 105 y 109. Esta interacción podría ser la causa de la disminución de la formación de biofilm por parte de estas cepas de Salmonella.