Péptidos de amaranto como inhibidores de la oxidación de lipoproteínas de baja densidad (LDL).

GARCÍA FILLERÍA, S. F. Y TIRONI, V. A.

Punta del Este

Congreso; 2° Congreso Iberoamericano de Ingeniería de los Alimentos; 2016

Asociación de Ingenieros Alimentarios del Uruguay (AIALU)

La enfermedad cardiovascular es una de las principales causas de mortalidad en las poblaciones occidentales, siendo ampliamente reconocido el rol de la oxidación de las LDL en la aterosclerosis. Dado que previamente se ha demostrado que péptidos de amaranto son capaces de neutralizar especies reactivas responsables de procesos oxidativos, el objetivo del presente trabajo fue analizar su acción frente a la oxidación de las LDL. Se evaluaron las siguientes muestras: Ad: digerido gastrointestinal simulado de aislado proteico, obtenido por tratamiento con pepsina (pH 2, 1h, 37ºC, agitación) seguido por pancreatina (pH 6, 1h, 37ºC, agitación); fracciones de Ad separadas mediante FPLC de exclusión molecular (columna Superdex 30, rango de separación < 10kDa). Las LDL fueron obtenidas a partir del plasma de voluntarios sanos mediante precipitación selectiva con polivinilsulfato y resuspensión en PBS (agitación, 37 ºC). Se evaluó la evolución de dienos conjugados en mezclas conteniendo 100 µl LDL (1 mg/ml), 55 µl muestra, 15 µl H2O2 (0,3% p/v) y 30 µl CuSO4 (100 µM), incubando a 37°C, 4 h y midiendo la absorbancia a 234 nm cada 5 min. Las curvas (Abs vs tiempo) fueron ajustadas por regresión no lineal (ecuación sigmoidal dose-response, variable slope, GraphPad software), obteniéndose el tiempo de inducción (tlag) y la velocidad de oxidación (v). Las concentraciones proteicas fueron determinadas mediante el método de Lowry.Ad (0,06-0,23 mg/mL) produjo aumento del tlag (47-82 %) y disminución (59-68 %) de v respecto del control. Las fracciones separadas por gel-filtración (presentaron diversos comportamientos: 1) F1-F15 (>8kDa) y F33-F38 (0,9-0,4 kDa): aumento de tlag (91-378 %) y aumento de v (25-122 %); 2) F16-F21 (3,8-8 kDa): aumento de tlag (106-234 %) y disminución de v (52-78 %); 3) F29-F32 (1,5-0,9 kDa): aumento de tlag (583-764 %) y disminución de v (36-51 %); 4) F22-F28 (3,8-1,5 kDa): no se observó formación de dienos conjugados. Para este último grupo se evaluaron también diluciones 1/5 de las fracciones, observándose aumento de tlag (49-101 %) y disminución de v (36-57 %). Las fracciones con mayor actividad fueron F27 y F28 (1,5-2 kDa). Estos resultados demuestran una prometedora acción antioxidante sobre las LDL por parte de péptidos generados por la digestión gastrointestinal de las proteínas de amaranto, presentando los más activos 13 a 18 aminoácidos (1,5-2 kDa). Para poder ejercer su acción in vivo, dichos péptidos deberán ser capaces de atravesar la pared intestinal lo cual se encuentra actualmente en estudio en nuestro laboratorio.