Detección de diferentes toxinotipos circulantes de Clostridium difficile en un centro de salud mediante análisis de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)

P. CARASI; F.M.TREJO; L.ARREGUI; SALTO, ILEANA; P.F. PEREZ; E.ALUL; A. CRIVARO; F.MAGARIÑOS; A.FACENTE

Rosario, Santa Fe.

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016, IV Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos ? CLAMME y la Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosi; 2016

AAM-ALAM

Clostridium difficile (CD) es un anaerobio esporulado, responsable de 15-25 % de las diarreas asociadas al uso de antibióticos. Como factores de virulencia destacan las toxinas A (TcdA), B (TcdB) y binaria (con dos componentes CDTA y CDTB). Los genes que codifican TcdA y TcdB, junto con tres genes complementarios (tcdE, tcdR y tcdC), se encuentran en un locus de patogenicidad (PaLoc) cromosomal de 19.6 kb. La ausencia del PaLoc caracteriza las cepas incapaces de producir TcdA y TcdB. En los últimos años se han detectado cepas con mayor virulencia que en comparación con la cepa de referencia VPI10463, presentan variaciones de secuencia en genes tcdA, tcdB y complementarios. Estas variaciones genéticas permiten la clasificación en diferentes toxinotipos. El objetivo de este trabajo fue determinar si existen diferentes toxinotipos de CD circulando en un mismo centro de salud público. Para ello, se evaluaron aislamientos de CD provenientes de pacientes internados con sintomatología e historia clínica compatible con infección por CD. Se estudiaron 6 aislamientos provenientes de materia fecal analizadas previamente mediante kits comerciales que detectan toxinas A y B o el antígeno común (glutamato deshidrogenasa) que detecta la presencia de la bacteria. Las cepas de C. difficile provinieron de muestras que fueron positivas para al menos una de estas características. Mediante técnica de PCR convencional con primers para los genes tcdA, tcdB, cdtA o cdtB se caracterizaron los aislamientos en estudio. Las cepas que carecen del PaLoc (tox-), muestran amplificación con primers específicos lo cual no ocurre en cepas que lo contienen (potencialmente toxigénicas). Para la toxinotipificación por RFLP, se utilizaron los primers B1 contenido en tcdB y A3 contenido en tcdA (diferentes a los empleados en la PCR convencional). Los productos fueron digeridos con Hinc y Acc para B1 y EcoRI para A3. Como referencia se empleó la cepa VPI10463 (hiperproductora de toxinas, toxinotipo 0). El análisis por PCR convencional mostró la presencia de dos tipos de perfiles genéticos: tcdA- /tcdB- /cdtA- / cdtB- (3 cepas) y tcdA+ / tcdB+ / cdtA- / cdtB- (3 cepas). La toxinotipificación por RFLP evidenció que en las cepas estudiadas se detectan los toxinotipos VIII y 0, II ó XIII (aún no resuelto). Se destaca también, la presencia de aislamientos tox(-) que son reactivos con los ensayos comerciales de detección. Los resultados demuestran que en el ámbito del HIGA Gandulfo, circulan cepas de C. difficile con variabilidad genética en genes de virulencia. Esto podría relacionarse con la internación de pacientes de diferentes regiones. Teniendo en cuenta que ciertos toxinotipos de C. difficile se asocian a cepas hipervirulentas, un estudio que incluya más aislamientos y otros centros de salud permitirá obtener datos epidemiológicos sobre las infecciones por C. difficile, permitiendo detectar los principales toxinotipos circulantes y contribuir al control de la enfermedad