Evaluación de la Actividad de Proteínas y Péptidos de Amaranto frente a la oxidación de las LDL

SUSAN F. GARCÍA FILLERÍA; VALERIA A. TIRONI

Buenos Aires

Jornada; Jornada FANUS SUstancias Bioactivas en Alimentos; 2016

FORO DE LA ALIMENTACIÓN, LA NUTRICIÓN Y LA SALUD

La incorporación con la dieta de componentes antioxidantes es importante para prevenir los daños producidos por las especies reactivas de oxígeno y de nitrógeno (ROS y RNS) sobre diferentes macromoléculas y sus consecuencias sobre distintos sistemas orgánicos, como el sistema cardiovascular (Jialal y col., 1996). La oxidación de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) es un importante factor inductor de procesos aterogénicos. Dado que estudios previos han demostrado la capacidad de proteínas y péptidos de Amaranthus mantegazzianus para neutralizar ROS y RNS en sistemas in vitro (Orsini Delgado y col., 2015), el objetivo de este trabajo fue evaluar la potencial capacidad de dichos componentes de inhibir o retardar la oxidación de las LDL.Se preparó aislado proteico de amaranto (A), el cual fue sometido a una digestión gastrointestinal simulada (fase estomacal: pepsina, pH 2, 1h, 37ºC, agitación; fase intestinal: pancreatina, pH 6, 1h, 37ºC, agitación), obteniéndose el digerido Ad. Este último fue separado mediante cromatografía FPLC de exclusión molecular (columna Superdex 30, rango de separación < 10kDa), colectándose distintas fracciones cuya concentración peptídica se determinó por el método de Lowry. Las LDL se obtuvieron a partir del plasma de voluntarios sanos mediante precipitación selectiva con polivinilsulfato (Biosystems) y resuspendidas en buffer PBS (pH 7,2). La concentración proteica de la fracción LDL fue determinada por el método de Lowry. La capacidad antioxidante de A, Ad y sus fracciones fue evaluada induciendo la oxidación de las LDL (0,58 mg/mL) por adición de solución de CuSO4 (15 uM) y H2O2 (0,02 % p/v) e incubación a 37°C durante 245 min, monitoreando la formación de dienos conjugados por medida de la absorbancia a 234 nm (lector de placas Synergy HT, Biotek) (Scheffer y col., 2000; Scoccia y col., 2011). Los datos obtenidos fueron ajustados mediante una regresión no lineal de tipo sigmoidal, determinando el tiempo de inducción (tlag) y la velocidad de oxidación (v: pendiente de la parte lineal de la curva).Se observó que distintas concentraciones de A (0,01 - 0,06 mg/mL en la mezcla final) no produjeron cambios significativos en los parámetros de oxidación de las LDL, mientras que las distintas concentraciones de Ad (0,01 - 0,06 mg/mL) produjeron un aumento de tlag y una disminución de v respecto al control; siendo la concentración de 0,03 mg/mL la más efectiva. En cuanto a las fracciones de FPLC-gel filtración de Ad pueden mencionarse un grupo de fracciones con masas moleculares entre 1,35 kDa y 6,5 kDa y concentraciones entre 0,01 y 0,08 mg/mL, las cuales inhibieron casi por completo la oxidación en el tiempo de medida y presentaron un comportamiento dosis-respuesta, disminuyendo su efecto a medida que disminuyó su concentración. Estos resultados reafirman la capacidad antioxidante de péptidos de amaranto y sugieren un potencial efecto sobre la prevención de eventos cardiovasculares por inhibición de la oxidación de las LDL, siendo necesario evaluar si los mismos pueden ser absorbidos a nivel intestinal.