Estudio de la actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto in vivo

RINALDI, G.; SABBIONE, A.C.; SCILINGO, A.; AÑÓN, M.C.

Jornada; Jornadas Fanus: sustancias bioactivas en alimentos; 2016

Las enfermedades cardiovasculares producen una gran cantidad de muerte en el mundo occidental. El consumo de alimentos funcionales que contengan componentes con actividad fisiológica comprobada y que logre disminuir la incidencia de dichas enfermedades podría considerarse como una estrategia interesante para lograr disminuir la morbimortalidad ocasionada por las mismas. En los últimos años existe una tendencia creciente a la utilización de péptidos derivados de proteínas alimentarias, capaces de ejercer diversas bioactividades relacionadas con el sistema cardiovascular (Hartmann y Meisel, 2007), entre ellas las proteínas de amaranto (Silva-Sánchez y col., 2008). Un trabajo previo (Sabbione y col., 2016) confirmó la presencia de péptidos con potencial actividad antitrombótica liberados de las proteínas de amaranto por simulación de la digestión gastrointestinal simulada. En el presente trabajo nos propusimos realizar ensayos con animales alimentados con proteínas de amaranto para determinar los efectos sobre la coagulación de la sangre de las ratas.Los aislados proteicos de amaranto se obtuvieron según Martínez y Añón (1996) con harina de Amaranthus hypochondriacus previamente desgrasada con hexano. Para el ensayo se emplearon 22 ratas macho wistar (WKAH/Hok) de entre 11-12 semanas de edad. Las dietas se formularon de acuerdo al Instituto Americano de Nutrición usando AIN-93G como dieta control (Reeves y col., 1993). Un grupo de animales recibió la dieta Amaranto, reemplazando parcialmente la fuente proteica, caseína, por aislado proteico de amaranto. Los animales se distribuyeron en 3 grupos: grupo control (GC), grupo amaranto (GA) y grupo heparina (GH), de modo que cada uno de ellos consumiera la dieta control, dieta amaranto y dieta control respectivamente. Al grupo heparina se le inyectó intraperitonealmente heparina sódica luego de 2 semanas de iniciado el ensayo. Luego de finalizado el período de alimentación los animales se anestesiaron inyectando por vía intraperitoneal pentobarbital sódico (25 mg/kg) y diazepam (2,5 mg/kg). La actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto se evaluó midiendo el Tiempo de Sangría (TS), determinación que estudia específicamente la actividad plaquetaria (etapa primaria de la hemostasia). Se efectuó un pequeño corte en la punta de la cola de los animales anestesiados y se registró el TS tocando el área de la incisión con papel de filtro a intervalos de 30 s, hasta observar detención del sangrado (Stenberg y col., 1998). Se obtuvo una muestra de plasma de cada animal, colocando la sangre en tubos falcon con citrato de sodio (2,5 g/100 ml, relación 1:9) y separándolo por centrifugación a 2500g durante 15 min a 20 °C. Mediante las pruebas globales de la hemostasia, tiempo de protrombina (TP), tiempo de trombina (TT) y tiempo de tromboplastina parcial activada (TTPA), (kits comerciales Wiener lab) se evaluó la actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto ingeridas por las ratas.El aislado proteico con el que se formuló la dieta contenía 71,3 ± 1,5 % (f = 5,85); 6,4 ± 0,6 %; 3,6 ± 0,1 %; 9,0 ± 0,8 %; 13,1 ± 0,9 %, de proteínas, agua, cenizas y carbohidratos+fibras expresado como %p/p respectivamente. Los resultados de la evaluación de la actividad antitrombótica se presentan en la siguiente tabla.Grupo de animalesTiempo de sangría TS (s)Pruebas globales de la hemostasiaTP ( s)TT ( s)TTPA ( s)GC230 ± 10a20,6 ± 2,3a96,4 ± 4,3a43.3 ± 2,9aGA270 ± 21a22,6 ± 2,0a113,1 ± 5,6b49.4 ± 6,0bGH360 ± 24.5b36,3 ± 11,0b> 600c89,8 ± 8,0cDiferentes letras en superíndice indican diferencias significativas (Test de Tukey, α = 0,05)El valor de TS del GH fue significativamente superior al de los otros dos grupos, confirmando el efecto de la heparina sobre la disminución en la actividad plaquetaria. Aunque no se encontró diferencia significativa en los TS de GC y GA, los resultados muestran una fuerte tendencia que sugiere que las proteínas de amaranto están involucradas en la inhibición de la formación del tapón plaquetario. El TT del GA aumentó el 17% comparado con el GC. Los tres grupos de animales presentaron TTPA significativamente diferentes; GA mostró un incremento del 14% respecto al GC. La prueba TP no mostró diferencias significativas entre GA y GC. En los tres ensayos los valores encontrados para el GH son significativamente mayores, resultado esperable ya que la heparina entre otros efectos, inhibe específicamente a la enzima trombina. Las pruebas globales de la hemostasia sugieren que los péptidos de amaranto liberados durante la digestión gastrointestinal alteran la vía común de la coagulación (estudiada por el TT), pudiendo generar cambios sobre la vía intrínseca (estudiada por el TTPA).Estos resultados confirmarían que las proteínas de amaranto contienen péptidos bioactivos encriptados, los cuales una vez liberados por digestión gastrointestinal presentan efectos inhibitorios de la coagulación, y se correlacionan con aquellos previamente encontrados en los ensayos in vitro (Sabbione y col., 2016). Este trabajo sugiere que las proteínas de amaranto podrían consumirse para actuar como potenciales agentes antitrombóticos.