Lactococcus lactis subsp. lactis CIDCA 8212 incluido en una película comestible de kefiran inhibe el efecto citópatico de Bacillus cereus B10502

PIERMARIA, JUDITH; INCHAURREGUI, FACUNDO; MINNAARD, JESSICA

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Las películas comestibles han comenzado a considerarse matrices alternativas para el delivery de probióticos o compuestos bioactivos. El kefiran es capaz de formar películas comestibles y, entre otras propiedades, posee actividad inhibitoria de factores exocelulares producidos por Bacillus cereus, cuya virulencia se asocia a la producción de toxinas y la interacción directa con los enterocitos.Lactococcus lactis, como otros microorganismos probióticos, inhiben el crecimiento de B. cereus, pero no hay evidencia de lo que ocurre luego de la inclusión de los lactococos en una matriz alimentaria.En este trabajo se evaluó la capacidad de Lactococcus lactis subsp. lactis de inhibir B. cereus luego de la incorporación del probiótico en películas de kefiran.Se obtuvieron esporos de B. cereus B10502 y sobrenadante filtrado (SNFBC) a partir de un cultivo de los esporos en medio BHI. Las cepas de Lactococcus lactis subsp. lactis (CIDCA 8212, 8247, 8221, 8345, 8242, 8224, 8243 y 8225) se cultivaron en caldo 1.1.1 obteniéndose los sobrenadantes filtrados (SNFLL) o los cocos, según correspondiera. La concentración de ácido láctico (HPLC) en los SNFLL fue de 81,51 mg/l (CIDCA 8212), 42,14 mg/L(CIDCA8243), 31,11 mg/l (CIDCA8224) y menor a 30 mg/L. para el resto de las cepas evaluadas.Todos los SNFLL inhibieron el desarrollo de los esporos sin variación en el número de bacterias vegetativas respecto al recuento inicial; en cambio el control sin SNFLL aumentó 3 órdenes de magnitud. El efecto desapareció al neutralizar los SNFLL.Los lactococos se incluyeron en suspensiones de kefiran 2% p/p y a través del moldeo y secado en estufa a 37 °C se obtuvieron las películas. Todas las cepas sobrevivieron al proceso, pero solo la cepa CIDCA 8212 no descendió su viabilidad. Las películas obtenidas resultaron transparentes, delgadas, con microestructura homogénea y sin modificación significativa de su resistencia a la tracción; sin embargo la elongación descendió de 24,9% a 16,5 %.En presencia de SNFLL de la cepa CIDCA 8212, obtenido a partir de los cocos incorporados en la matriz o de cultivos planctónicos, se incubaron esporos (5 exp6 esporos/ml) con monocapas de células Caco-2/TC7 observándose reversión total del desprendimiento producido por los esporos solos (1,72% ± 26,82 vs 100% ± 1, método cristal violeta), indistintamente de la procedencia del SNFLL.La incubación de los enterocitos con SNFBC pretratado con la cepa CIDCA 8212 proveniente de la matriz produjo 39,81 % ± 10,98 de desprendimiento, significativamente menor (p