ACTIVIDAD ANTITUMORAL in vitro DEL KEFIRAN Y SUS PRODUCTOS DE FERMENTACION

MEDRANO, MICAELA; GANGOITI MV; PASTOR, DANIELA ALEJANDRA; ABRAHAM, ANALÍA G.

CABA

Congreso; XV Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos (XV CYTAL); 2015

AATA

Los exopolisacáridos sintetizados por bacterias lácticas presentan potencialidad para ser incorporados en alimentos funcionales. El kefiran es un glucogalactano no digerible sintetizado por bacterias lácticas presentes en gránulos kéfir, que ha sido estudiado por sus propiedades inmunomoduladoras, anticolesterolémicas, hipoglucémicas y antitumorales. Esta última ha sido abordada in vivo, pero poco se sabe si la microbiota colónica y sus metabolitos tendrían relevancia. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto del kefiran y los productos del metabolismo por la microbiota presente en barros fecales humanos, en la proliferación y muerte celular de enterocitos provenientes de un adenocarcinoma de colon (línea HT29). La proliferación se cuantificó por cristal violeta y los procesos de muerte celular se determinaron por tinción con ioduro de propidio y microscopía de fluorescencia. El kefiran se aisló de gránulos de kéfir mediante precipitación con etanol. Para evaluar su efecto en las células HT29, éstas se incubaron durante 48 hs en medio de cultivo (DMEM) conteniendo kefiran (0,1 a 1g/L). Para estudiar el efecto de los productos de fermentación, se formuló un medio mineral mínimo adicionando kefiran como única fuente de carbono en concentraciones de 0,03 a 1 g/L. Este medio se inoculó con barros fecales humanos y se dejó fermentar en anaerobiosis a 37°C durante 24 hs. Luego, los sobrenadantes (SN) se neutralizaron y filtraron, se realizaron diluciones seriadas en DMEM, y se incubaron con las células HT29 durante 48 hs. Se cuantificaron los ácidos orgánicos producidos presentes en los SN por HPLC. Por recuento en placa (MRS-Agar, anaerobiosis), en los medios conteniendo kefiran se encontraron microorganismos cuya morfología, movilidad, reacción catalasa y tinción de Gram serian compatibles con bacterias productoras de butirato (género Roseburia sp.).Se encontró que el kefiran inhibió el crecimiento de las células tumorales de un modo dosis dependiente y estadísticamente significativo con respecto al control de células sin tratar, y se encontró un mayor porcentaje de células en proceso de muerte en las fosas tratadas. Por otro lado, cuando se inoculó con los barros fecales el medio conteniendo kefiran como fuente de carbono, se encontró crecimiento bacteriano y acidificación. En los SN se encontraron ácidos orgánicos en diferente proporción; se detectó butirato en concentraciones entre 200-800 ppm. Cuando estos SN se incubaron con las células HT29, se encontró una disminución en la proliferación celular y un incremento en los procesos de muerte, en comparación con el control de medio sin fermentar. De acuerdo a los resultados obtenidos, se puede concluir que el kefiran y sus productos de metabolismo por la microbiota colónica comensal, estarían ejerciendo in vitro una actividad biológica en las células provenientes de un adenocarcinoma de colon, y esto podría estar en relación con el efecto antitumoral observado previamente in vivo por otros autores. Estos resultados contribuyen a la comprensión de las propiedades benéficas para la salud en general -y antitumorales en particular- atribuidas al kefiran, constituyendo un aporte para considerar este producto natural como fuente de metabolitos para el desarrollo de nuevos alimentos funcionales.