EFECTO DE CULTIVOS DE BACTERIAS LÁCTICAS SOBRE LA EXPRESIÓN DEL PROMOTOR GEN flaA DE Campylobacter

BOLLA, P.A.; ROBLES LUNA G; DE URRAZA P.J; DE ANTONI G.L.

Cordoba

Congreso; XI congreso argentino de microbiología; 2007

Asocioación argentina de microbiología AAM

Campylobacter es un bacilo gram (-) y uno de los agentes etiológicos más comunes en la producción de diarreas en niños, causadas generalmente por la ingesta de alimentos contaminados. El flagelo es uno de sus factores de virulencia más importantes en, se encuentra codificado en los genes flaA y flaB. Con el objetivo de estudiar el efecto de los sobrenadantes sobre este promotor, se obtuvo un cultivo de E.coli DH5a contiendo el plásmido puente pRYflaA::luxCDABE. Determinando la luminiscencia de los cultivos en presencia de los distintos sobrenadantes podemos estudiar el efecto de los mismos, en la expresión del reportero bajo el control del promotor del gen flaA. El cultivo se obtiene por transformación química de E.coli DH5a con el plásmido pRYflaA::luxCDABE (luminiscente), utilizando kanamicina (Km) 25 mg/ml como antibiótico de selección. Se ensayaron 20 cepas de Lactobacillus sp y Lactococcus sp aisladas de diferentes productos lácteos, en particular Lactococus lactis subespecie lactis (8221), Lactobacilus plantarum (83114), Lactobacilus kefir (8348) y levaduras aisladas de kefir. Para ello, las cepas se cultivaron a 30 ºC durante 24 hs en leche al 12 % estéril. Se obtuvieron por centrifugación los sobrenadantes de cultivo, se neutralizaron e incluyeron en agar casoy al 10% con Km. El sobrenadante de cultivo de Lact. lactis se dialisó con membranas de 6 KDa y se lo trató con proteinasa K. Un cultivo de 24 hs de E.coli DH5a pRYLux CDABE se sembró en superficie y se incubó a 37ºC durante 24 hs.Luego se incubó a 37ºC durante 24 hs. Las bacterias crecidas se lleva a DO 1 a 600nm y se mide la luminiscencia en RLU, con y sin el agregado de decanal, sustrato de la reacción. Las RLU fueron normalizadas respecto al control. Se observó que la cepa de 8221, aislada de Kefir, produjo 0.036 RLU, el agregado de proteinasa K arrojó resultados similares, por el contrario, el dializado mostró 1.6 RLU. Si bien los sobrenadantes de las cepas de lactobacilos y levaduras aisladas de Kefir producen una disminución en la expresión (0.1-0.5 RLU), esta es mucho menor respecto a la cepa 8221.Sin embargo los sobrenadantes obtenidos del co-cultivo de estas cepas con el Lact. lactis no produjeron disminución en la expresión, si no que se obtuvieron valores similares a los de la cepa 8221.El co-cultivo de todas las cepas de kefir arrojó una medida de luminiscencia de 1.9 RLU. Similares resultados se obtuvieron con las cepas aisladas de otros productos lácteos (1-4 RLU).   CONCLUSIONES   La cepa 8221 produce una regulación negativa del promotor del gen flaA al igual que los lactobacilos. Puede asumirse que se verá afectada la expresión y consiguiente síntesis de flagelina, alterando la virulencia. El co-cultivo y el resto de las bacterias lácticas no presentan este efecto. En el caso de la cepa 8221 la regulación es producida por una molécula de peso molecular menor a 6 KDa la cual no es afectada por la proteinasa K.