Estudio in vitro del efecto del uso de fagos en la infección con Escherichia coli enterohemorrágica sobre células Hep-2

DINI, CECILIA; DE URRAZA, PATRICIO J.

Estudio in vitro del efecto del uso de fagos en la infección con Escherichia coli enterohemorrágica sobre células Hep-2

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

El descubrimiento a principios del siglo XX de fagos capaces de atacar bacterias patógenas sugirió inmediatamente la idea de su uso para el control de enfermedades infecciosas. La aparición de patógenos resistentes a un rango cada vez más amplio de antibióticos plantea la búsqueda métodos de control alternativos, y el estudio de la fagoterapia se retomó con más fuerza. A fin de realizar una primera aproximación sobre las condiciones óptimas para el uso de fagos como biocontrol de E. coli enterohemorrágica, se realizaron ensayos de infección sobre células Hep-2 con la cepa de colección EDL 933 de E coli O157:H7 y se estudió el efecto del agregado del fago lítico MFMA 933P aislado de materia fecal vacuna. En cada ensayo, placas de 24 fosas de células confluentes de 48 hs, fueron lavadas 3 veces con PBS e infectadas con 0,5 ml de EDL 933 en DMEM de adhesión (aprox. 5x108 UFC/fosa). Se analizaron las UFC adheridas a las células sin el agregado de fago y con fago en una multiplicidad de infección (MDI) de 10 y 1 fagos/UFC respectivamente. Después de incubar durante 2 hs. a 37 ºC en atmósfera con 5% de CO2, las fosas se lavaron 5 veces con PBS, se lisaron las células con H2O destilada estéril y se realizó un recuento en placa por duplicado de las UFC adheridas por fosa en cada condición. El ensayo se repitió 3 veces. Una fosa de cada placa se adicionaron 108 fagos en 0,5 ml de DMEM de adhesión sin el agregado de bacteria y se hizo un recuento de los fagos después de la incubación. En otro ensayo se realizó una observación por microscopía de fluorescencia de células Hep-2 incubadas con diferentes proporciones fago/bacteria y teñidas con naranja de acridina.. Las bacterias adheridas después de la incubación con el agregado de fago (expresado como porcentaje de sobrevivientes respecto a las bact. adheridas sin fago) fueron en promedio de 2,3% para una MDI de 10 y de 2,6% para una MDI de 1. El número de fagos no disminuyó luego de la incubación sin bacterias. Por microscopia se observa una disminución notable en la densidad celular y un mayor numero de células redondeadas cuando la concentración de bacterias aumenta sin el agregado de fagos. La adición de fagos aumenta la densidad celular y disminuye notablemente el numero de células redondeadas. Este efecto es más notorio cuanto mayor es la concentración de fagos adicionada. conclusion Para las 2 MDI ensayadas se observó una disminución de 2 log en el número de bacterias adheridas sobrevivientes. No hubo disminución de la cantidad de particulas infectrivas de fago por interacción inespecífica con las células eucariotas. De la microscopía se concluye que cuanto mayor es la relación fago/bacteria en la fosa, menor es el efecto citotóxico observado sobre las células Hep-2.