Incremento en la acumulación de transglutaminasa tisular humana en células vegetales a través de la coexpresión con un anticuerpo simple cadena-fusionado a un polímero similar a elastina

MARIN VIEGAS VANESA SOLEDAD; PETRUCCELLI, SILVANA

Mar del Plata

Congreso; XV Congreso Latinoamericano de Fisiología Vegetal; 2014

La transglutaminasa tisular humana (htTG) es una proteína de interés para el diagnóstico de la enfermedad celíaca. Resulta altamente tóxica en varios sistemas de expresión por lo que se acumula en niveles bajos. A fin de sortear las dificultades en la síntesis y recuperación, se evaluó la estrategia de coexpresar htTG y un anticuerpo simple cadena (scFv-2G3) específico de htTG fusionado a polímeros similares a elastina (ELP). La hipótesis planteada fue que la interacción de scFv-ELP con htTG la protegería de la degradación. Para evaluarla, se generó una fusión del scFv-2G3 a un ELP insoluble en las condiciones de crecimiento de las plantas. Se efectuaron ensayos de expresión temporal en hojas de Nicotiana benthamiana. El efecto en la acumulación de htTG se evaluó por microscopía confocal e inmunoblot. Al expresar RFP-htTG se observa la típica estructura del retículo endoplásmico (ER) y se detecta una banda tenue por inmunoblot. Al expresar RFP-ELP se observa la formación de cuerpos proteicos (PB) dentro del ER. Al coexpresar RFP-htTG y scFv-ELP se observa htTG integrada a los PBs. Ensayos de inmunoblot muestran que htTG se acumula en mayores niveles en presencia del scFv-ELP, confirmando que esta estrategia podría utilizarse como método de estabilización.