Obtención y caracterización de anticuerpos monoclonales contra antígenos de Giardia intestinalis.

SERRADELL, M. A.; HUMEN, M. A. Y PÉREZ, P. F.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

La infección por <i>Giardia intestinalis</i> es una parasitosis que afecta el tracto gastrointestinal. La giardiasis puede ser sintomática, pudiendo llegar a causar síndrome de mala absorción alimentaria, o cursar en forma asintomática. Actualmente el diagnóstico de la enfermedad se realiza mediante examen microscópico en busca de quistes o trofozoitos del parásito en materia fecal. Sin embargo, existen ensayos comerciales para la detección de antígenos de <i>G. intestinalis</i> en materia fecal, los cuales muestran buena sensibilidad, pero su elevado costo los hace de difícil acceso sobre todo en organismos de salud pública. En el presente trabajo nos hemos propuesto obtener y caracterizar anticuerpos monoclonales (AcMo) específicos contra antígenos de <i>G. intestinalis</i>, con el fin de evaluar su potencial utilidad en el desarrollo de nuevos métodos inmunoquímicos para el diagnóstico de la infección. Los AcMo se obtuvieron mediante la técnica de hibridización de células somáticas murinas y se empleó un lisado de trofozoitos de la cepa H7 de <i>G. intestinalis</i> como inmunógeno. La selección de los hibridomas obtenidos se realizó por ELISA indirecto. Los hibridomas fueron clonados por dilución límite y la reactividad de los clones seleccionados se analizó por inmunoblotting (IB) y dot-blot frente a extractos antigénicos obtenidos a partir de trofozoitos y quistes del parásito. Como resultado de la hibridización, se obtuvieron y seleccionaron cuatro hibridomas productores de AcMo específicos, pero solo dos de ellos (clones 3A5 y 4H10) mostraron una alta reactividad por ELISA, por lo cual fueron escogidos para la realización de los ensayos posteriores. El análisis de los perfiles de reactividad por IB mostró que el AcMo 3A5 reconoce un número elevado de bandas de PM inferiores a 83 kDa en los extractos de la cepa H7, mientras que el AcMo 4H10 revela solo 2 bandas de 60 y 42 kDa frente al mismo extracto antigénico. Ambos AcMo mostraron perfiles de reactividad similares a los ya descriptos frente a extractos antigénicos obtenidos a partir de otras cepas de <i>G. intestinalis</i>  (C6 y 1267). Asimismo, el AcMo 4H10 fue capaz de detectar la presencia de antígenos de <i>G. intestinalis</i>  en muestras de materia fecal de animales infectados mediante dot-blot.   Conclusiones y perspectivas futuras: Los resultados obtenidos sugieren que los AcMo 3A5 y 4H10 podrían convertirse en herramientas útiles para el desarrollo de métodos de detección de antígenos de <i>G. intestinalis</i> por ejemplo en el formato de ELISA de captura. Con estas perspectivas, nos proponemos ampliar los estudios de reactividad frente a diferentes aislados, donde también caracterizaremos la eventual reactividad cruzada frente a otros patógenos intestinales y comenzaremos con la producción y purificación de los AcMo seleccionados.