CIDCA   05380
CENTRO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO EN CRIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Activación de la vía de NFkB en células HT29NFkBGFP infectadas con Bacillus cereus MVL2011
Autor/es:
BOLLA, P. A.; MINNAARD J.; ROLNY, I. S.; LOPEZ, A.C.; TISCORNIA, I; BOLLATI-FOGOLÍN, M; ALIPPI, A.M.; PEREZ, P.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XI Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de Alimentos IV Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos III Simposio Argentino de Conservación de Alimentos; 2012
Institución organizadora:
DAMyC
Resumen:
Bacillus cereus es un microorganismo causante de patologías intestinales como diarrea y émesis, con reportes de casos de diferente gravedad. A diferencia de otros microorganismos causantes de ETAs, en Argentina no se analiza la presencia de este microorganismo en las muestras biológicas de los pacientes que presentan una o ambas patologías, aun cuando han sido descartadas la presencia de otras bacterias. La cepa objeto de este estudio (MVL2011) fue aislada de un matambre de pollo, que había sido consumido por un paciente joven sano, quien fue hospitalizado con deshidración luego de tener síntomas compatibles con una intoxicación por B. cereus. La activación de vías de señalización intracelular son fundamentales en la virulencia de los microorganismos patógenos. En este contexto se estudio la capacidad de la cepa de Bacillus cereus MVL2011 de estimular la vía de NFkB en células HT29GFP. La cepa MVL2011 se creció en medio BHI adicionado con 0,1% de glucosa a 32°C en agitación durante 3hs. Luego se centrifugo a 13200 rpm durante 15 min, se lavó tres veces con buffer PBS y se resuspendió en DMEM adicionado con cloranfenicol (100 ug/ml). Las células HT29-GFP se crecio en placas de 24 fosas durante 48 hs en medio DMEM 10 % SFB a 37°C en 5% CO2/95% O2. A fin de estudiar el efecto del microorganismo sobre la activación de la vía NFkB, las células HT29-GFP se infectaron con diferentes dosis de MVL2011 (Multiplicidad de infección (MDI): 10, 25, 50, 100, 250 y500) en presencia y ausencia de gentamicina 100ug/ml y se incubaron 16 hs a 37°C en 5% CO2/95% O2 . Como control positivo de activación de la vía se utilizó TNFa Posteriormente se realizó una observación microscópica, se desprendieron las células mediante tratamiento con tripsina, se centrifugaron y lavaron 2 veces con buffer PBS y se fijaron con paraformaldehido al 1%. Los análisis se realizaron por citometría de flujo. Se observó que la cepa MVL2011 fue capaz de activar la via NFKb a MDI 100 y 250, observándose una mejor activación a MDI 100. Con MDI menores (10, 25 y 50), no se observó activación de la vía. La dosis de MVL2011 equivalente a MDI= 500 provocaron destrucción de la monocapa de HT29GFP. El tratamiento con gentamicina disminuye la activación de la vía. Los resultados demuestran que la activación de la vía de NFKb en células HT29GFP por la cepa MVL2011 es dependiente de la dosis, es afectada por la presencia de un antibiótico aminoglucósido y sería dependiente de la cepa, ya que estudios realizados con otra cepa de B. cereus, T1 (aislada de una intoxicación alimentaria) no demostró activación de la via con una MDI=100.