Estudio del destino intracelular de Bacillus cereus en macrófagos murinos.

ROLNY, I; RACEDO, S.; PÉREZ, P.

Congreso; MICROAL; 2012

Los macrófagos (MQ), constituyen una de las principales líneas de defensa frente a los microorganismos (Mo) patógenos. Luego de la fagocitosis, las vacuolas que contienen Mo adquieren marcadores endosomales tempranos los cuales son reemplazados gradualmente por otras proteínas tales como las LAMP (proteínas de membranas asociadas a lisosomas) indicadoras de maduración. En este proceso también se expresan moléculas en la superficie celular, tales como MHCII y CD86. El objetivo de este trabajo fue evaluar la interacción de las cepas M2, B10502 y 2 de B. cereus con los MQ y sus vías de internalización. Para los análisis de co-localización, los microorganismos fueron marcados con CFDA. Usando una MOI=20, se estudió: a) Co-localización con lisosomas tardíos: Luego de 90 min de infección, los MQ fueron lavados y se obtuvo la fracción post-nuclear la cual fue marcada con anti-LAMP-1 marcado con ficoeritrina (PE). Para el análisis se uso citometría de flujo (CF). b) Co-localización con compartimentos ácidos: Después de 60 y 90 min de infección, las células se fijaron y analizaron por Microscopía Confocal, el marcador utilizado fue Lysotracker. c) Expresión de moléculas de superficie: Los MQ infectados se incubaron durante 48 hs en presencia de cloranfenicol, luego se lavaron y marcaron con anti-MHCII-PE y anti-CD86-PE. Las muestras se analizaron por CF. Resultados: Los porcentajes de vacuolas positivas para LAMP-1 que contenían la cepa M2 (25,3 ± 1,2) fueron significativamente mayores (p