Validación del sistema THP1 para el estudio del efecto inmunomoduladotorio del kefiran

LARROUYET L.; MINNAARD J; PEREZ P.F.; ABRAHAM A. G.

Congreso; XI Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de los Alimentos. IV Congreso Argentino Microbiología de alimentos. III Simposio Argentino de Conservación de Alimentos; 2012

Ciertos expopolisacáridos provenientes de las bacterias ácido lácticas poseen efectos inmunomodulatorios y antitumorales en función de su composición glucídica, propiedades fisicoquímicas y esturctura. En particular el kefirán, producido por los gránulos de Kefir es un glucogalactano ramificado neutro, no digerible, hidrosoluble, cuya capacidad inmunomodulatoria ha sido demostrada in vivo en el contexto intestinal, variando el balance de células asociadas al sistema inmune de mucosas. La línea celular monocítica humana THP1, en sus diferentes grados de diferenciación, es comúnmente usada como modelo experimental de funcionamiento macrofágico, dado que los macrófagos tisulares no pueden ser expandidos ex vivo. El objetivo del trabajo fue evaluar la factibilidad de utilizar este modelo celular para estudiar el efecto inmunomodulador del kefirán. Para ello, las células fueron crecidas a distintos tiempos en DMEM suplementado con 10% de suero fetal bovino adicionado con PMA 200nM. El PMA es un activador que utiliza la vía de la protein kinasa C similar a su análogo natural el diacilglicerol Se utilizó como marcador de diferenciación la expresión en superficie del HLAdr, medido desde el día 1 hasta el día 5. Se marcaron las células con el anticuerpo anti-HLAdr streptoavidina y se reveló con ficoeritrina biotinilada y se analizó por citometría de flujo.. Paralelamente se crecieron las células con el mismo medio de cultivo suplementado con kefirán 800mg/l, y una combinación de PMA y kefirán. Se observó que la expresión de HLAdr en las celulas THP1aumenta entre el día 2 y 4, de activación y decae al día 5. En función de lo expuesto se seleccionó para analizar el fefecto del kefiran un tiempo de incubacion de 3 días. La incubacion de las células con kefiran no produjo cambios en la expresión de HLAdr (%=2.23) con respecto a los controles de células crecidas solo en medio de cultivo (%=2.46). Se vio un efecto de sinergismo en la expresión de HLAdr, cuando las células se cultivaron en presencia kefirán y PMA (%=6.15) con respecto a la expresión de HLAdr cuando fueron cultivadas solo con PMA (%=3.39). Estos resultados indican que es factible utilizar las células TPH1 como modelo para evaluar la actividad inmunomodulatoria de polisacáridos bacterianos. Se evidenció un efecto sinergico en la expresión de HLAdr en estas células al estimularlas con PMA y kefiran.