ACTIVACIÓN DE LA VIA DE NFKB EN CÉLULAS HT-29-NF-KB-GFP INFECTADAS CON BACILLUS CEREUS MVL2011

15.2.5. PA BOLLA, J MINNAARD, IS ROLNY, AC LÓPEZ, I TISCORNIA, M BOLLATI-FOGOLÍN, AM ALIPPI, PF PÉREZ

Congreso; XI Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de Alimentos (COLMIC), el IV Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos (CAMA) y el III Simposio Argentino de Conservación de Alimentos (SACA); 2012

Bacillus cereus es un microorganismo causante de patologías intestinales que cursan con diarrea y/o vómitos. Este microorganismo ejerce sus efectos biológicos a través de la producción de toxinas y mediante la interacción directa con las células eucarióticas. Como en otros patógenos, la activación de la vía de NFkB podría estar relacionada con la virulencia de este microorganismo. La cepa objeto de estudio (MVL2011) fue aislada de un matambre de pollo, que había sido consumido por un individuo joven sano, quien fue hospitalizado con deshidratación luego de tener síntomas compatibles con ingestión de toxina emética de B. cereus. El objetivo del trabajo fue determinar el efecto de la cepa virulenta MLV2011 sobre la activación de la vía de NFkB. Se utilizó la línea celular de enterocitos humanos HT-29-NF-kB-hrGFP (Tiscornia et al., 2012) reportera de la activación de la vía de NFkB. La cepa MVL2011 se creció en medio BHI (0,1 % de glucosa), 3 h a 32°C con agitación. Luego se centrifugó, se lavó con PBS y se suspendió en DMEM con cloranfenicol (100 µg/ml) para evitar el desarrollo de los microorganismos. Las células HT-29-NF-kB-hrGFP fueron cultivadas durante 48 h en medio DMEM con 10 % suero fetal bovino, infectadas con diferentes dosis de MVL2011 (Multiplicidad de infección(MDI): 10, 25, 50, 100, 250 y 500 bacterias/célula en presencia o ausencia de gentamicina 100 µg/ml e incubadas durante 16 h a 37°C. Como control positivo se utilizó TNF (5 ng/ml). Las células fueron tripsinadas, fijadas con paraformaldehido (1 %) y analizadas por citometría de flujo. La cepa MVL2011 activó la vía de NFkB con valores de 24 ± 4 y 15 ± 4 % de células GFP(+) para MDI de 100 y 250, respectivamente. La disminución de la activación a MDI 250 podría indicar daño celular ya que con MDI 500 hay destrucción de la monocapa. MDI menores (10, 25 y 50) no produjeron activación (aproximadamente 2 % de células GFP(+)). El tratamiento con gentamicina disminuyó la activación de la vía (15 ± 3 y 12 ± 2 % de células GFP(+) para MDI 100 y 250, respectivamente) y no se observó activación por otra cepa de B. cereus (T1) aislada de un brote de intoxicación alimentaria (3.2 ± 0.3 % de células GFP(+)). Los resultados demuestran que la cepa MVL2011 es capaz de activar la vía de NFkB la cual es una característica que no está presente en todas las cepas virulentas de B. cereus y podría ser relevante para la patogénesis de este microorganismo. Tiscornia et al. ESACT Proceedings, 2012;5(3):261-263.