Actividad Biológica de péptidos de Amaranthus hypochondriacus

MORONTA, JULIÁN; DOCENA, GUILLERMA; AÑÓN, MARÍA CRSTINA

Círculo de Oficiales de Mar, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

Jornada; Jornadas Internacionales de Proteínas y Coloides Alimentarios, JIPCA VI; 2011

Laboratorio de Biopolímeros, Nanopartículas y Coloides Alimentarios de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la Universidad de Buenos Aires, Argentina, en colaboración con el grupo dirigido por la Dra María C. Añón del CIDCA-CONICET-UNLP

El objetivo general del presente trabajo fue evaluar la potencialidad del amaranto como fuente de compuestos bioactivos, en particular péptidos, para su posterior utilización como suplemento dietario y/o desarrollo de alimentos funcionales. Dichos péptidos se encuentran encriptados como entidades independientes en la estructura proteica y son liberados por digestión intestinal o durante el procesado del alimento, estos podrían ejercer un efecto inmunomodulatorio sobre procesos inflamatorios gobernados por inmunidad innata y adaptativa, en particular sobre los mecanismos Th2-dependientes centrales en  procesos alérgicos. Los aislados proteicos de amaranto fueron preparados a partir de harina desgrasada de Amaranto hypochondriacus. Se procedió a hidrolizar la muestra "in vitro" en forma controlada con enzima alcalasa, de manera de obtener un alto grado de hidrólisis (GH>20). Los aislados obtenidos fueron caracterizados mediante electroforesis en geles de Tricina-SDS-PAGE y por cromatografía RP-HPLC. Los hidrolizados obtenidos, así como las fracciones proteicas de amaranto con actividad biológica fueron subfraccionadas mediante RP-HPLC y posteriormente enriquecidas por ultrafiltración en AMICON. Para luego ser subfraccionadas  por RP-HPLC.               La actividad inmunomoduladora se determinó mediante el empleo de la línea celular humana transgénica de intestino Caco-2 ccl20:luc, transfectada con el gen reportero ccl20-luciferasa (quimoquina proinflamatoria de inmunidad innata), cuya activación es dependiente de la traslocación nuclear de NFkB. La cual es inducida por el activador flagelina, aislada de Salmonella typhymurium. Las muestras analizadas fueron los hidrolizados proteicos, las fracciones proteicas, subfracciones y péptidos purificados. Los resultados obtenidos en este trabajo mostraron una mayor modulación de la actividad inflamatoria a medida que se incrementa el GH, siendo más importante a un GH de 30%. Este comportamiento concuerda con datos bibliográficos los cuales indican que secuencias peptídicas más cortas presentan efecto inmunomodulatorio. La actividad detectada es dependiente de la cantidad de muestra ensayada y de la fracción analizada; siendo las fracciones más activas aquellas de carácter hidrosoluble separadas por RP-HPLC. Con referencia a las subfracciones obtenidas por fraccionamiento en RP-HPLC a partir de las fracciones activas antes mencionadas, se han obtenido muestras con muy alta capacidad de modulación cercana al 100%. Actualmente se está trabajando en la identificación del o los péptidos responsables de la modulación y en la medición de la actividad modulatoria mediante técnicas de Amplificación de mRNA por PCR Real-time.