Actividad antitrombótica de fracciones proteicas de semillas amaranto modificadas por hidrólisis enzimática

ANA CLARA SABBIONE, ADRIANA ALICIA SCILINGO Y MARÍA CRISTINA AÑÓN

Capital federal

Congreso; XIII Congreso CYTAL 2011; 2011

AATA - Asociación Argentina de Tecnólogos Alimentarios

      El amaranto es un pseudocereal de origen americano. Sus pequeñas semillas contienen un porcentaje alto de proteínas de reserva que se caracterizan por presentar un perfil aminoacídico completo y mayor contenido de lisina que los cereales. Este hecho, sumado a ciertas ventajas agronómicas que presenta su cultivo, lo convierten en un ingrediente alimentario interesante. Actualmente se conoce que las proteínas alimentarias, así como algunos péptidos encriptados en ellas, presentan diversas acitividades biológicas tales como actividad antihipertensiva, antioxidante, inmunomoduladora. Es de muestro interés analizar la actividad antitrombótica de las proteínas de amaranto y sus péptidos obtenidos por hidrólisis enzimática.       En el presente trabajo se utilizaron semillas de Amaranthus mantegazzianus (INTA-Alguil, La Pampa, Argentina). El aislado y las fracciones proteicas se preparon a partir de la harina desgrasada con hexano según los protocolos de extracción de Martínez y col., 1996 y Konishi y col., 1991 respectivamente. Los hidrolizados proteicos se obtuvieron empleando alcalasa (1,71U Anson/g sólido; 0,08 µl/mg de aislado, 20 min, 37ºC) y luego tripsina (10600 U BAEE/mg sólido; 0,01 mg/mg de aislado, 20 min, 37ºC). La acción de ambas enzimas se detuvo calentando la mezcla de reacción (85ºC, 10 min).       Las muestras se caracterizaron mediante la determinación de la concentración proteica (Kjeldahl), del grado de hidrólisis (método del TNBS) y la realización de electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente reductor, de cromatografía de filtración en gel de exclusión molecular y de calorimetría diferencial de barrido.       Para determinar la actividad antitrombótica in vitro se utilizó el método de las microplacas (Yang y col., 2006; Zhang y col., 2007) que consiste en adicionar a cada pocillo una solución de fibrinógeno 0,1% junto con la muestra a estudiar solubilizada empleando variadas concentraciones y una solución de trombina 12UI/ml para iniciar la coagulación. A los 0 minutos y luego de 10 minutos de incubación a 37°C se midió la absorbancia a 405nm para obtener finalmente el porcentaje de inhibición de la coagulación de las muestras ensayadas.       Se pudo observar que la hidrólisis de las muestras ensayadas genera polipéptidos de menor masa molecular que los hallados en las muestras sin tratamiento enzimático provocando una pérdida de estructura de las proteínas de amaranto. Los ensayos realizados con el método de las microplacas permiten obtener curvas del tipo % Inhibición de la coagulación vs Concentración, cuyos resultados sugieren que en los aislados proteicos de amaranto y en sus fracciones se encontrarían presentes péptidos con potencial actividad antitrombótica, cuya potencia aumentaría con la hidrólisis en la mayoría de los casos. Comparativamente se podría pensar que la fracción glutelinas de las semillas de amaranto mantegazziano son quienes presentan la mayor actividad antitrombótica in vitro dado que su IC50 es de 80±5µg/ml, siendo ese valor más de 100 veces inferior que el obtenido para el aislado hidrolizado.