Efecto de las defensinas humanas 1 y 2 sobre la membrana de bacterias lácticas intactas y sobre liposomas formados por sus lípidos

A.A HUGO, E. E. TYMCZYSZYN, A. GÓMEZ ZAVAGLIA AND P.F PÉREZ

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Latinoamericano de Microbiología e Higiene de Alimentos; 2012

Las defensinas son péptidos antimicrobianos (AMPs) con actividad contra un amplio rango de patógenos. Las β-defensinas humanas son secretadas por las células epiteliales de distintas mucosas formando la primera línea de defensa. Al igual que otros AMPs son pequeñas moléculas catiónicas que interaccionan con los grupos negativos de la membrana celular provocando su disrupción. Las bacterias lácticas pueden presentar diferente sensibilidad a las β-defensinas lo cual afectaría su capacidad para resistir el pasaje gastrointestinal y ejercer su efecto probiótico. Lactobacillus delbruekii subsp. lactis CIDCA 133 y Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus CIDCA 331 tienen diferente susceptibilidad a las  β-defensinas humanas 1 (HBD-1) y 2 (HBD-2), así como también a factores secretados por enterocitos (Hugo y col. 2010). Mientras que la cepa CIDCA 133 es capaz de resistir el efecto inhibitorio de ambas defensinas, la cepa CIDCA 331 es fuertemente inhibida por ambas, en particular por HBD-2. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de HBD-1 y HBD-2 sobre la membrana de bacterias intactas y sobre liposomas formados con lípidos extraídos de las mismas. dichas bacterias. La disrupción de la membrana plasmática en células intactas se estudió por citometría de flujo utilizando la sonda ioduro de propidio (IP). El efecto sobre los liposomas se evaluó a través de la cinética de liberación de carboxy fluoresceína (CF) encapsulada medido por espectroscopia de fluorescencia. Se utilizó nisina como control positivo. La exposición a HBD-2 produjo la permeabilización de la membrana de Lactobacillus bulgaricus tanto en bacterias intactas como en liposomas. La incorporación de IP por parte de la cepa CIDCA 333 fue de 2.5 a 3.5 veces superior a la de la cepa CIDCA 133 para 4 y 8 µg/ml de HBD-2. En el mismo sentido concentraciones de 1 y 2 µg/ml de HBD-2 provocaron una liberación del 26 al 35% de CF desde los liposomas de la cepa CIDCA 333 sin afectar a los liposomas de la cepa 133. La alta sensibilidad de la cepa CIDCA 333 a la HBD-2 indica una fuerte interacción con sus lípidos de membrana. La membrana de la cepa 333 presenta  una mayor proporción de fosfolípidos que de glicolípidos, haciéndola más negativa. Estos resultados indican la importancia de la composición lipídica de la membrana, frente a la acción de péptidos antimicrobianos como las defensinas. Además representan un avance para comprender la interacción de HBDs sobre microorganismos probióticos y su interacción con el huésped.