Selección de microorganismos con capacidad de modulación de la respuesta innata en epitelio intestinal empleando un sistema reportero CCL20-luciferasa

SERRADELL M A; ROMANIN D E; GARROTE G L; DE ANTONI G; RUMBO M

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y LIV Reunión anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Sociedad Argentina de Inmunología (SAI)

La microflora intestinal normal mantiene una interrelación compleja con el sistema inmune de mucosas, que ha sido poco caracterizada a nivel molecular. Se conocen algunos mecanismos activos de modulación de la respuesta innata en mucosas por microorganismos que ilustran la posible diversidad de vías de modulación existente. CCL20 es una quimoquina producida por células epiteliales, siendo altamente inducible en respuesta a estímulos proinflamatorios, incluyendo la señalización a través de TLR5-flagelina. El objetivo del presente trabajo es seleccionar microorganismos con capacidad de modular la respuesta inmune innata del epitelio intestinal. La selección se realizó empleando una línea celular Caco-2 transfectada en estable con una construcción reportera empleando el promotor de CCL20 humano y la luciferasa de luciérnaga (Caco-2 CCL20-Luc). Monocapas de células Caco-2 CCL20-Luc de 5 días de crecimiento se trataron durante 1h con suspensiones de diferentes lactobacilos, bifidobacterias y levaduras potencialmente probióticas. Se estimuló el sistema empleando flagelina obtenida de Salmonella enterica serovar Enteritidis (1µg/mL). Luego de 6 hs de incubación se analizó la actividad luciferasa sobre el lisado celular. Se observó que 3 (L plantarum, L casei y L kefir) de 11 cepas bacterianas estudiadas producen una moderada inhibición (25%), mientras que 2 (S cereviceae y K lactis) de las 3 levaduras analizadas disminuyen en un 40% la activación inducida por flagelina. La actividad modulatoria detectada fue dependiente del número de microorganismos coincubados y de la viabilidad de los mismos y no correlacionó con cambios en el pH del medio observados al final de la coincubación. El sistema Caco-2 CCL20-Luc permitió seleccionar para estudios posteriores, cepas de microorganismos con capacidad de modular la respuesta innata en epitelio intestinal.