Caracterización de la reactividad cruzada entre leche de vaca y soja mediante técnicas de inmunoproteómica: Mapeo de epitopes compartidos por MALDI-TOF MS

CANDREVA ÁNGELA; TREJO SEBASTIÁN; FERRER-NAVARRO MARIO; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO

San Miguel de Tucuman

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Sociedad Argentina de inmunologia

Por su alta exposición en la población, la leche de vaca (LV) y la soja se han convertido en importantes alergenos alimentarios. Las fórmulas a base de proteínas de soja (PS) se utilizan con frecuencia como sustitutos de LV en pacientes alérgicos con edades superiores a los 6 meses. Sin embargo, existe una intolerancia clínica en pacientes sensibilizados únicamente a LV que puede explicarse por reactividad cruzada (RC) entre los sistemas proteicos. Nuestro grupo ha descripto como alergenos de RC las caseínas bovinas (CB) y las fracciones 7S y 11S de soja. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la reactividad de PS que podrían compartir epitopes lineales con CB, empleando anticuerpos monoclonales específicos de las distintas CB (mAb-CB) 1D5, 4C3 y 3B5. Se empleó espectrometría de masas MALDI-TOF para identificar los epitopes reconocidos por los mAbs-CB. Las CB puras fueron digeridas enzimáticamente (Tripsina-GluC), los péptidos obtenidos fueron separados por RP-HPLC y luego analizados por dot blot utilizando los mAb-CB. Los péptidos reactivos se caracterizaron por MALDI-TOF MS. En paralelo, los mAb-CB fueron inmovilizados en partículas magnéticas y posteriormente se incubaron con la mezcla de los péptidos obtenida por proteólisis. Se compararon por MALDI-TOF los perfiles correspondientes a los péptidos unidos por los mAbs-CB, con respecto a los no reconocidos. Se identificaron 2 péptidos de αS1-caseína (aas34-45, 106-115) y 1 de Κ-caseína (aas56-84) reconocidos por los mAbs-CB. Estos mAbs reconocen también las PS: subunidades α, α’ y β de la β-conglicinina, P34 y A4A5B3. Empleando herramientas bioinformáticas se identificaron zonas de alta identidad secuencial entre estas proteínas y los péptidos de CB que podrían explicar la RC descripta. En conclusión, se identificaron 3 epitopes potenciales de CB que muestran RC con alergenos de soja. La metodología aplicada significa un importante avance en la caracterización molecular de la RC entre alergenos de soja y LV, y podría ser aplicada a la predicción de nuevas reactividades cruzadas.