CIDCA   05380
CENTRO DE INVESTIGACION Y DESARROLLO EN CRIOTECNOLOGIA DE ALIMENTOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Criopreservación de semillas de cítricos
Autor/es:
GRAIVER NATALIA; CALIFANO ALICIA; ZARITZKY NOEMÍ
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso CYTAL- Congreso Argentino de Ciencia y Tecnología de Alimentos AATA; 2011
Resumen:
La semilla es el principal órgano reproductivo de la mayoría de las plantas superiores; su almacenamiento
constituye una manera de mantener viable por largos periodos el germoplasma. Se reconocen tres categorías de
semillas: ortodoxas, recalcitrantes e intermedias. Las ortodoxas pueden ser desecadas hasta contenidos de
humedad muy bajos sin sufrir daños; su longevidad aumenta cuando disminuye el contenido de humedad (CH) y
la temperatura. En contraste, las semillas recalcitrantes no pueden ser desecadas por debajo de un CH
relativamente alto sin causarles daño. Las semillas intermedias presentan cierta sensibilidad a la desecación y su
viabilidad se reduce a bajas temperaturas; estas semillas no pueden ser almacenadas en nitrógeno líquido (NL)
sin un proceso de deshidratación parcial previo. Las semillas de cítricos pertenecen a la categoría intermedias y
su CH en el momento de la inmersión en NL debe considerarse como el factor más crítico en la criopreservación.
Los objetivos de este trabajo fueron: a) investigar el CH óptimo para la criopreservación semillas de cítricos
(Citrus sinensis, Citrus paradisi, Citrus reticulata var.Criolla y Citrus reticulata var.Dancy), analizando su
viabilidad, b) determinar la relación entre el contenido en lípidos de las semillas y su contenido de agua no
congelada; c) establecer las relaciones entre la humedad relativa de equilibrio (RH%), el CH de las semillas, la
presencia de agua congelable y el porcentaje de germinación después de la inmersión en NL.
El contenido lipídico de las semillas analizadas se cuantificó por Soxhlet obteniéndose valores comprendidos
entre 33.6 y 43.5 % en base seca. Por una parte se analizó la tolerancia de las semillas a la deshidratación
exclusivamente y por otro a la deshidratación y posterior exposición a NL. Para estudiar la tolerancia a la
deshidratación las semillas fueron desecadas a 20ºC con soluciones salinas saturadas que proporcionan ERH
entre 11 y 95%. Las semillas deshidratadas fueron colocadas en condiciones de germinación, la cual se realizó
sobre arena húmeda en cajas plásticas cerrada a 25ºC. El CH de las semillas en el equilibrio (expresadas como
gH2O/gbase seca) se determinó gravimétricamente en estufa de secado a 103ºC hasta peso constante. Se
modelaron las isotermas de sorción utilizando el modelo simplificado de D´arcyWatt y el de GAB. Para el
estudio de la factibilidad de criopreservación, las semillas, una vez deshidratadas en las condiciones descriptas
anteriormente, fueron envueltas en papel de aluminio y sumergidas en NL. Las semillas congeladas fueron luego
sumergidas en un baño de agua a 37ºC previo al test de germinación. Asimismo se determinaron los
termogramas mediante calorimetría diferencial de barrido (DSC) en los tejidos del cotiledón de las especies
testeadas a diferentes contenidos de humedad para cuantificar la entalpía de fusión del hielo y la cantidad de
agua no congelable. Se analizaron también por DSC muestras del extracto lipídico de semillas para identificar las
transiciones de lípidos en los termogramas. Se observó que el límite recomendable de deshidratación de las
semillas de cítricos previo al tratamiento con NL se corresponde con el contenido de agua no congelada del
tejido, lo que confirma que para lograr la supervivencia de las semillas criopreservadas se debe evitar la
formación de hielo intracelular.Citrus sinensis, Citrus paradisi, Citrus reticulata var.Criolla y Citrus reticulata var.Dancy), analizando su
viabilidad, b) determinar la relación entre el contenido en lípidos de las semillas y su contenido de agua no
congelada; c) establecer las relaciones entre la humedad relativa de equilibrio (RH%), el CH de las semillas, la
presencia de agua congelable y el porcentaje de germinación después de la inmersión en NL.
El contenido lipídico de las semillas analizadas se cuantificó por Soxhlet obteniéndose valores comprendidos
entre 33.6 y 43.5 % en base seca. Por una parte se analizó la tolerancia de las semillas a la deshidratación
exclusivamente y por otro a la deshidratación y posterior exposición a NL. Para estudiar la tolerancia a la
deshidratación las semillas fueron desecadas a 20ºC con soluciones salinas saturadas que proporcionan ERH
entre 11 y 95%. Las semillas deshidratadas fueron colocadas en condiciones de germinación, la cual se realizó
sobre arena húmeda en cajas plásticas cerrada a 25ºC. El CH de las semillas en el equilibrio (expresadas como
gH2O/gbase seca) se determinó gravimétricamente en estufa de secado a 103ºC hasta peso constante. Se
modelaron las isotermas de sorción utilizando el modelo simplificado de D´arcyWatt y el de GAB. Para el
estudio de la factibilidad de criopreservación, las semillas, una vez deshidratadas en las condiciones descriptas
anteriormente, fueron envueltas en papel de aluminio y sumergidas en NL. Las semillas congeladas fueron luego
sumergidas en un baño de agua a 37ºC previo al test de germinación. Asimismo se determinaron los
termogramas mediante calorimetría diferencial de barrido (DSC) en los tejidos del cotiledón de las especies
testeadas a diferentes contenidos de humedad para cuantificar la entalpía de fusión del hielo y la cantidad de
agua no congelable. Se analizaron también por DSC muestras del extracto lipídico de semillas para identificar las
transiciones de lípidos en los termogramas. Se observó que el límite recomendable de deshidratación de las
semillas de cítricos previo al tratamiento con NL se corresponde con el contenido de agua no congelada del
tejido, lo que confirma que para lograr la supervivencia de las semillas criopreservadas se debe evitar la
formación de hielo intracelular.2O/gbase seca) se determinó gravimétricamente en estufa de secado a 103ºC hasta peso constante. Se
modelaron las isotermas de sorción utilizando el modelo simplificado de D´arcyWatt y el de GAB. Para el
estudio de la factibilidad de criopreservación, las semillas, una vez deshidratadas en las condiciones descriptas
anteriormente, fueron envueltas en papel de aluminio y sumergidas en NL. Las semillas congeladas fueron luego
sumergidas en un baño de agua a 37ºC previo al test de germinación. Asimismo se determinaron los
termogramas mediante calorimetría diferencial de barrido (DSC) en los tejidos del cotiledón de las especies
testeadas a diferentes contenidos de humedad para cuantificar la entalpía de fusión del hielo y la cantidad de
agua no congelable. Se analizaron también por DSC muestras del extracto lipídico de semillas para identificar las
transiciones de lípidos en los termogramas. Se observó que el límite recomendable de deshidratación de las
semillas de cítricos previo al tratamiento con NL se corresponde con el contenido de agua no congelada del
tejido, lo que confirma que para lograr la supervivencia de las semillas criopreservadas se debe evitar la
formación de hielo intracelular.