Caracterizaci¨®n de la reactividad cruzada entre leche bovina y soja mediante t¨¦cnicas de inmunoprote¨®mica: mapeo de los epitopes compartidos por MALDI-TOF MS.

CANDREVA ANGELA; TREJO SEBASTIAN; FERRER-NAVARRO MARIO; AVILES FRANCESC; PETRUCCELLI SILVANA; DOCENA GUILLERMO H.

Congreso; Reuni¨®n Anual de la Sociedad Argentina de Inmunolog¨ªa; 2011

Por su alta exposici¨®n en la poblaci¨®n, la leche bovina (LV) y la soja se han convertido en importantes alergenos alimentarios. Las f¨®rmulas a base de prote¨ªnas de soja (PS) se utilizan con frecuencia como sustitutos de LV en pacientes al¨¦rgicos (ALV) con edades superiores a los 6 meses. Sin embargo, existe una intolerancia cl¨ªnica en pacientes sensibilizados ¨²nicamente a LV que puede explicarse por reactividad cruzada (RC) entre los sistemas proteicos. Nuestro grupo ha descripto como alergenos de RC las case¨ªnas bovinas (CB) y las fracciones 7S y 11S de soja. El objetivo del rpesente trabajo fue estudiar la reactividad de prote¨ªnas  de soja que podr¨ªan compartir epitopes lineales con CB, empleando anticuerpos monoclonales espec¨ªficos de las distintas CB (mAb-CB) 1D5, 4C3 y 3B5. Se emple¨® MALDI-TOF y espectrometr¨ªa de masa (MALDI-TOF MS) para identificar los epitopes reconocidos por los mAbs-CB. Las CB puras fueron digeridas enzim¨¢ticamente (Tripsina-GluC), los p¨¦ptidos obtenidos fueron separados por RP-HPLC y luego analizados por dot blot utilizando los mAb-CB. Los p¨¦ptidos reactivos se caracterizaron por MALDI-TOF MS. En paralelo, los mAb-CB fueron inmovilizados en part¨ªculas magn¨¦ticas y posteriormente se incubaron con la mezcla de los p¨¦ptidos obtenida por prote¨®lisis. Se compararon por MALDI-TOF los perfiles correspondientes a los p¨¦ptidos unidos por los mAbs-CB, con respecto a los no reconocidos. Se identificaron 2 p¨¦ptidos de ¦ÁS1-case¨ªna (aas34-45, 106-115) y 1 de ¦ª-case¨ªna (aas56-84) reconocidos por los mAbs-CB. Estos mAbs reconocen tambi¨¦n las PS: subunidades ¦Á, ¦Á¡¯ y ¦Â de la ¦Â-conglicinina, P34 y A4A5B3. Empleando herramientas bioinform¨¢ticas se identificaron zonas de alta identidad secuencial entre estas prote¨ªnas y los p¨¦ptidos de CB que podr¨ªan explicar la RC descripta. En conclusi¨®n, se identificaron 3 epitopes potenciales de case¨ªnas que muestran RC con alergenos de soja. La metodolog¨ªa aplicada significa un importante avance en la caracterizaci¨®n molecular de la reactividad cruzada entre alergenos de soja y leche bovina, y podr¨ªa ser aplicada a la predicci¨®n de nuevas reactividades cruzadas.