DESARROLLO DE UN PROTOTIPO DE METODOLOGÍA DE DIAGNÓSTICO RÁPIDO CON MEMBRANAS TRACK-ETCHED DE PET, UTILIZANDO COMO MODELO LA DETECCIÓN DE ROTAVIRUS DEL GRUPO A (RVA) EN MUESTRAS CLÍNICAS.

AGUIAR, CONSTANZA; ARGUELLES, MARCELO H.; GLICKMAN, G.; MANDILE, MARCELO G.; SILVESTRE, D; GRASSELLI, MARIANO; PERI IBAÑEZ, ESTEFANIA S.; FLORES, CONSTANZA Y.; TEMPRANA, FACUNDO F.; CASTELLO, ALEJANDRO A.; AGUIAR, CONSTANZA; ARGUELLES, MARCELO H.; GLICKMAN, G.; MANDILE, MARCELO G.; SILVESTRE, D; GRASSELLI, MARIANO; PERI IBAÑEZ, ESTEFANIA S.; FLORES, CONSTANZA Y.; TEMPRANA, FACUNDO F.; CASTELLO, ALEJANDRO A.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Los rotavirus del grupo A (RVA) son una causa importante de morbi-mortalidad en niños pequeños en todo el mundo. Si bien, las vacunas licenciadas han demostrado ser efectivas en países de medio a alto nivel socioeconómico, en regiones de bajos ingresos y pobres condiciones socio-sanitarias muestran un menor rendimiento. Por ello, es importante el establecer estrategias para evaluar el impacto de la vacunación en zonas de bajo nivel socioeconómico y con déficits en higiene y sanitación del Gran Buenos Aires y otras regiones del país. El presente trabajo está encuadrado en una línea general de I + D que se orienta hacia el desarrollo de distintas opciones de metodología de detección rápida, en particular para el diagnóstico de RVA, factible de utilizarse en cualquier servicio básico de salud por personal sin entrenamiento. Si bien, existen pruebas de este tipo disponibles comercialmente, la mayoría deben ser importadas, limitando su acceso para el sistema público de salud. Por esta razón, se apunta, además, a la utilización de insumos de bajo costo, en lo posible fabricados en el país, para maximizar las posibilidades de vinculación y transferencia al sector productivo, lo que podría constituir el primer paso de una sustitución de importaciones. En el trabajo aquí presentado, se desarrolló un prototipo de metodología de inmunofiltración (IF) basado en el uso de membranas track-etched de PET (tereftalato de polietileno) (TEMs), un material nanoestructurado disponible comercialmente, que cuenta con la ventaja de que su estructura puede ser modificada con una alta precisión para obtener poros perfectos a través del material, con el tamaño, la forma y la densidad que se desee.Se evaluaron distintas condiciones de reacción y reactantes, modificando buffers, aditivos y preparaciones de anticuerpos, y utilizando nanopartículas de oro como partículas detectoras. Para testear el prototipo, se utilizó un número de muestras clínicas positivas y negativas para RVA de la colección del LIV. Además, se llevó a cabo una comparación preliminar de performance y sensibilidad contra la inmunocromatografía de flujo lateral (ICFL) y ELISA desarrollados en el LIV, ambos métodos con una sensibilidad igual a superior a sus equivalentes comerciales. Se lograron determinar las condiciones óptimas de reacción y se pusieron a punto las concentraciones ideales de reactivos y anticuerpos.Se obtuvieron resultados satisfactorios en cuanto a sensibilidad y especificidad, comparables a los de la ICFL, para la detección de la mayoría de las muestras evaluadas. A pesar de los resultados favorables, es preciso seguir trabajando en el formato del ensayo, para poder llevar a cabo su validación con un número mayor de muestras clínicas. Como tareas de continuación de este desarrollo, se evaluará el uso de nanopartículas de oro de mayor tamaño y membranas modificadas con grupos reactivos con el fin de mejorar el prototipo de ensayo, aumentar la sensibilidad en general del método, y poder aplicarlo a la detección de otros patógenos.