Estudio "in vitro" de progenitores neurales de retina aviar

J TAU; M REYNALDO; NG CARRI

Tafi del Valle

Congreso; SBT; 2009

Sociedad de Biologia de Tucuman

El suceso de hallar células madres en la retina hizo pensar en la posibilidad de  regeneración a partir de la terapia celular. En la retina aviar se conocen distintas regiones anatómicas que contienen progenitores, particularmente en una llamada Zona Marginal Ciliar/Circunferencial (ZMC). Estos descubrimientos favorecieron la concreción de muchos trabajos, aunque es poco lo que se sabe acerca de estas células en cultivo. Por tanto, el objetivo del presente trabajo fue analizar el comportamiento de progenitores neurales de la retina en un bioensayo desarrollado a partir de células primarias, en condiciones basales y de estimulación trófica. Los cultivos se realizaron a partir de ZMC embrionaria de pollos y codornices de 13-19 días de incubación. Las neuroesferas generadas se implantaron en gel colágeno tipo I, substrato 3-D que ofrece un ambiente apropiado a la migración y/o extensión neurítica (diferenciación y proliferación), en condiciones basales y con factores tróficos -NTN, NGF y NT3 20ng/ml- durante 4 días. El cultivo de neuroesferas se extendió por períodos de hasta 10 meses. Las neuroesferas primarias y las sometidas al bioensayo trófico fueron estudiadas por inmunocitoquímica, obteniéndose resultados positivos para proliferación (PCNA, Ki67, BrdU) y progenitores neurales (Pax6, A2B5, Foxn4). Las células generadas a partir de las neuroesferas estimuladas fueron positivas para vimentina, GFAP, 3cb2 y presentaron marcación tenue para neurofilamentos. Este patrón positivo se relaciona con la morfología observada in vitro, donde la mayoría de estas células mostraron morfología glial y una minoría neuritas. Hemos logrado establecer un bioensayo de progenitores que nos permite aseverar que es posible cultivar y encauzar progenitores de la ZMC in vitro, para caracterizar sus mecanismos de proliferación y diferenciación bajo estímulo trófico externo.