¨Preparación y caracterización de nanopartículas core/shell de oro/albumina mediante radiosíntesis con fines terapéuticos¨

CONSTANZA Y. FLORES; ESTEFANIA ACHILLI; SILVIA ALONSO ; MARIANO GRASSELLI

Cordoba

Encuentro; ´´Nanocórdoba´´; 2014

Universidad Nacional de Cordoba

¨Preparación y caracterización de nanopartículas núcleo/carcaza de oro/albúmina mediante entrecruzamiento radio-inducido ¨ Constanza Y. Flores1, Estefania Achilli1, Silvia Alonso2 y Mariano Grasselli1 1Laboratorio de Materiales Biotecnológicos y2Laboratorio de Biomembranas? Grupos vinculados al IMBICE ? CCT La Plata, Departamento de Ciencia y Tecnología, UNQ, Roque Saenz Peña 352, Bernal, Bs. As constanzaflores@hotmail.com Las nanopartículas de oro (NPsAu) modificadas superficialmente con diferentes biomoléculas son utilizadas desde hace varias décadas en ensayos diagnósticos rápidos. Recientemente se está estudiando su utilización en terapéutica.Esto se debe a su biocompatibilidad y a que presentan propiedades únicas, dependientes de su tamaño, forma y recubrimiento. Por otra parte, en estos últimos años, se estábuscado desarrollarNPs que cumplan simultáneamentefunciones diagnósticas como terapéuticas, para utilizarlas como una herramientasuperadora en el campo de la medicina. El objetivo del presente trabajo es preparar y caracterizar NPsAurecubiertas con multicapas de albumina humana (HSA) y bovina (BSA)que mantengan las propiedades funcionales de las proteínas y las propiedades ópticas de las NPsAu, en una nanoestructuratipo núcleo/carcaza. Recientemente nuestro grupo de trabajo describió la formación de NPs de BSA a partir del entrecruzamiento radioinducido con rayos gamma de 60Co en unasoluciónetanólica de la proteína [1]. Es importante remarcar que el tamaño de las NPs obtenidas depende fundamentalmente de la concentración inicial de solvente agregado. Estas NPs conservan en un gran porcentaje la estructura tridimensional de las proteínas que lo componen. En este trabajo se estudia combinar ambas metodologías para obtener NPs núcleo/carcaza.En primer lugar, se prepararon NPsAu mediante la reducción química de una sal de Au en medio acuoso. A continuación, una solución etanólicadeHSA o BSA se agregó a las NPsAu y posteriormente se entrecruzaron por irradiación gamma con el fin de generar la nanoestructura sin la utilización de un agente entrecruzante químico. La irradiación gamma se realizó en una fuente de 60Cobalto con una dosis de 10 kGy. Las NPsAu-HSA y NPsAu-BSA obtenidas fueron purificadas por centrifugación a fin de eliminar el exceso de proteína y etanol(10.000 rpm - 20 min). Este procedimiento se repitió tres veces. Por último, se redispersaron en buffer fosfato pH 7. Se estudiaron tres concentraciones de etanol al 30, 40 y 50% en la preparación final.Las NPsAu-HSA y NPsAu-BSA fueron caracterizadas mediante espectroscopia de UV-visible e infrarrojo, microscopia de transmisión electrónica (TEM) y dispersión dinámica de la luz (DLS). En el espectro de UV-visible se observó el clásico pico de plasmones superficiales en aproximadamente 532 nm, indicando la presencia de NPs con una concentración de 30%de etanol, en las concentraciones restantes no se observó la presencia del mismo.Cuando se compara al espectro obtenido de las NPsAu sin modificar, se observó un leve corrimiento de la longitud de onda, esto también fue informado por diversos autores. Mediante DLS, se determinó que las nuevas NPs poseen un diámetro promedio de aproximadamente de 90 nm. Por otra parte, las imágenes de TEM evidenciaron que las NPs poseen forma esférica y la presencia de un halo alrededor del núcleo metálico demostrando la presencia de la albúmina. Además, se determinó el diámetro de las NPs, mostrando valores menores a los obtenidos por DLS.En los espectros deFT-IR, no se pudo evidenciar la estructura de la albúmina pero si la presencia del Au. Posteriormente se evaluó la estabilidad de las NPsAu-BSA en diferentes buffers y medios de cultivos, para futuras aplicaciones en cultivos celulares. En conclusión, se lograron obtener NPstipo núcleo/carcasa donde esta última no interfiere con las propiedades ópticas del Au y, según estudios preliminares, muestran un mejor comportamiento en condiciones fisiológicas para su uso en cultivos celulares. [1].Soto Espinoza, S.L., et al., Radiation synthesis of seroalbumin nanoparticles.Radiation Physics and Chemistry, 2012. 81(9): p. 1417-1421.