IMBICE   05372
INSTITUTO MULTIDISCIPLINARIO DE BIOLOGIA CELULAR
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Preparacion y caracterizacion de nanoparticulas nucleo/carcasa de oro/albumina mediante entrecruzamiento radio-inducido
Autor/es:
CONSTANZA FLORES; ACHILLI, ESTEFANIA; SILVIA ALONSO; MARIANO GRASSELLI
Lugar:
Cordoba
Reunión:
Encuentro; Nanocordoba 2014; 2014
Institución organizadora:
Universidad Nacional de Cordoba
Resumen:
Las nanopartıculas de oro (NPsAu) modificadas superficialmente con diferentes biomoleculas son utilizadas desde hace varias décadas en ensayos diagnósticos rápidos. Recientemente se esta estudiando su utilización en terapéutica. Esto se debe a su biocompatibilidad y a que presentan propiedades únicas, dependientes de su tamaño, forma y recubrimiento. Por otra parte, en estos últimos anos, se esta buscado desarrollar NPs que cumplan simultáneamente funciones diagnosticas como terapéuticas, para utilizarlas como una herramienta superadora en el campo de la medicina. El objetivo del presente trabajo es preparar y caracterizar NPsAu recubiertas con multicapas de albumina humana (HSA) y bovina (BSA) que mantengan las propiedades funcionales de las proteínas y las propiedades ópticas de las NPsAu, en una nanoestructura tipo núcleo/carcasa. Recientemente nuestro grupo de trabajo describió la formación de NPs de BSA a partir del entrecruzamiento radioinducido con rayos gamma de 60Co en una solución etanolica de la proteína [1]. Es importante remarcar que el tamaño de las NPs obtenidas depende fundamentalmente de la concentracion inicial de solvente agregado. Estas NPs conservan en un gran porcentaje la estructura tridimensional de las proteínas que lo componen. En este trabajo se estudia combinar ambas metodologías para obtener NPs núcleo/carcasa. En primer lugar, se prepararon NPsAu mediante la reduccion quımica de una sal de Au en medio acuoso. A continuación, una solución etanolica de HSA o BSA se agreg´o a las NPsAu y posteriormente se entrecruzaron por irradiación gamma con el fin de generar la nanoestructura sin la utilización de un agente Entrecruzante qu´ımico. La irradiaci´on gamma se realiz´o en una fuente de 60Cobalto con una dosis de 10 kGy. Las NPsAu-HSA y NPsAu-BSA obtenidas fueron purificadas por centrifugacion a fin de eliminar el exceso de proteına y etanol (10.000 rpm - 20 min). Este procedimiento se repitio tres veces. Por ´ultimo, se redispersaron en buffer fosfato pH 7. Se estudiaron tres concentraciones de etanol al 30, 40 y 50% en la preparaci´on final. Las NPsAu-HSA y NPsAu-BSA fueron caracterizadas mediante espectroscopia de UV-visible e infrarrojo, microscopia de transmisi´on electr´onica (TEM) y dispersi´on din´amica de la luz (DLS). En el espectro de UV-visible se observ´o el cl´asico pico de plasmones superficiales en aproximadamente 532 nm, indicando la presencia de NPs con una concentraci´on de 30% de etanol, en las concentraciones restantes no se observo la presencia del mismo. Cuando se compara al espectro obtenido de las NPsAu sin modificar, se observo un leve corrimiento de la longitud de onda, esto también fue informado por diversos autores. Mediante DLS, se determino que las nuevas NPs poseen un diámetro promedio de aproximadamente de 90 nm. Por otra parte, las imágenes de TEM evidenciaron que las NPs poseen forma esférica y la presencia de un halo alrededor del núcleo metálico demostrando la presencia de la albumina. Ademas, se determino el diámetro de las NPs, mostrando valores menores a los obtenidos por DLS. En los espectros de FT-IR, no se pudo evidenciar la estructura de la albumina pero si la presencia del Au. Posteriormente se evaluó la estabilidad de las NPsAu-BSA en diferentes buffers y medios de cultivos, para futuras aplicaciones en cultivos celulares. En conclusión, se lograron obtener NPs tipo núcleo/carcasa donde esta ultima no interfiere con las propiedades ópticas del Au y, seg´un estudios preliminares, muestran un mejor comportamiento en condiciones fisiologicas para su uso en cultivos celulares. [1] Soto Espinoza, S.L., et al., Radiation synthesis of seroalbumin nanoparticles. Radiation Physics and Chemistry, 2012. 81(9): p. 1417-1421.