Caracterización in vitro de actividades metabólicas en el hígado y en diferentes segmentos intestinales de ovinos.

MATÉ L.; VIRKEL G.; LIFSCHITZ A.; SALLOVITZ J.; LANUSSE C

General Pico, La Pampa

Jornada; XVII Jornadas Argentinas y XII Jornadas latinoamericanas de fármaco-toxicología veterinaria.; 2007

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Pampa

Las enzimas que intervienen en el metabolismo oxidativo de xenobióticos (fase I) se denominan oxidasas de función mixta (citocromo P 450 -CYP- y flavin monooxigenasa) y se encuentran en el retículo endoplásmico liso de las células. No existen dudas que la biotransformación de xenobióticos se lleva a cabo principalmente en el hígado, aunque se ha reportado actividad metabólica en diferentes tejidos extrahepáticos como la mucosa intestinal. Además de su rol principal en la absorción de nutrientes y agua, la mucosa intestinal es la vía principal de entrada de xenobióticos al organismo y posee las enzimas necesarias para la transformación de los mismos por medio de diferentes reacciones metabólicas de fase I y II. Diferentes actividades N-desmetilasa CYP-dependientes han sido identificadas en microsomas intestinales de ovinos y bovinos. En humanos, CYP 3A4 es la principal isoenzima presente en los enterocitos aunque su distribución no es uniforme a lo largo del tracto gastrointestinal. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar in vitro actividades metabólicas N-desmetilasa CYP-dependientes en el hígado y en diferentes segmentos del intestino delgado de ovinos. Se prepararon microsomas hepáticos y de 3 segmentos del intestino delgado (duodeno, yeyuno e ileon) de ovinos Corriedale machos adultos (n=2). Todas las fracciones microsomales fueron incubadas con diferentes sustratos marcadores de la actividad y de la expresión de diferentes CYPs: eritromicina y triacetiloleandomicina (TAO) N-desmetilasa (CYP 3A); aminopirina y clorfeniramina N-desmetilasa (CYP 2C). Cada sustrato fue incubado en presencia de un sistema productor de NADPH y de 1 mg de proteína microsomal. El formaldehído formado fue cuantificado fluorimétricamente luego de incubar con el reactivo de Nash una alícuota del sobrenadante de la reacción metabólica.Se prepararon microsomas hepáticos y de 3 segmentos del intestino delgado (duodeno, yeyuno e ileon) de ovinos Corriedale machos adultos (n=2). Todas las fracciones microsomales fueron incubadas con diferentes sustratos marcadores de la actividad y de la expresión de diferentes CYPs: eritromicina y triacetiloleandomicina (TAO) N-desmetilasa (CYP 3A); aminopirina y clorfeniramina N-desmetilasa (CYP 2C). Cada sustrato fue incubado en presencia de un sistema productor de NADPH y de 1 mg de proteína microsomal. El formaldehído formado fue cuantificado fluorimétricamente luego de incubar con el reactivo de Nash una alícuota del sobrenadante de la reacción metabólica. Se presentan resultados preliminares de una serie de estudios destinados a caracterizar diferentes actividades metabólicas de fase I y II en diferentes segmentos intestinales de rumiantes. Las actividades metabólicas observadas en los microsomas hepáticos fueron utilizadas como valores de referencia. Estos resultados muestran la presencia de las subfamilias CYP 3A y CYP 2C en los diferentes segmentos del intestino delgado de ovinos. El rol de la mucosa intestinal del rumiante en el metabolismo de diferentes xenobióticos continúa bajo estudio en nuestro laboratorio.