Citometría de flujo en la determinación de ploidía en el ciclo de vida de Leathesia marina (Phaeophyceae)

POZA AILEN M.; PARODI ELISA R.; GAUNA M. CECILIA; TONICELLI GINA A.

Mar del Plata

Congreso; XVIII Congreso Latinoamericano de Ciencias del Mar-COLACMAR 2019; 2019

La determinación de la ploidía se ha utilizado para dilucidar diferentes etapas del ciclo de vida en muchas algas. La citometría de flujo constituye una herramienta conveniente para medir el contenido de ADN nuclear, ya que permite el análisis de miles de núcleos en pocos minutos. El objetivo de este trabajo fue evaluar los niveles de ploidía de las diferentes morfologías presentes en el ciclo de vida de Leathesia marina obtenidas en cultivo in vitro, mediante el uso de citometría de flujo. Los cultivos se iniciaron a partir de fragmentos fértiles de macrotalos, con esporangios uniloculares y pluriloculares. Pequeñas porciones de talo se desintegraron con buffer (Peters et al. 2004), se filtraron a 10 μm, se añadió 100 μL de solución de PI-ARNasa y se midió su contenido de ADN después de 20 min. en citómetro de flujo FACSCalibur (INBIOSUR UNS-CONICET). El estudio reveló 4 diferentes morfologías en el ciclo de vida de L. marina: un macrotalo esporofítico diploide, un microtalo globular esporofítico diploide ydos microtalos ramificados haploides: uno erecto y uno postrado. Los núcleos aislados de las células de los macrotalos presentaron tres poblaciones celulares diferentes, que produjeron un pico 2C en la fase celular G1, un pico 4C más pequeño en G2 y un pico 1C pequeño, posiblemente causado por esporas haploides originadas por meiosis. Los núcleos aislados de los microtalos globulares fueron 2C, seguidos por la fase S y un pico 4C. Los núcleos aislados de microtalos ramificados erectos fueron picos 1C y picos 2C más pequeños, evidenciando un crecimiento celular activo. Sin embargo, los núcleos de microtalos ramificados postrados solo estuvieron en fase G1, sin división celular, correspondientes a talos latentes. El uso de la citometría de flujo resulto ser una exitosa herramienta para la determinación del ciclo de vida heteromórfico y celularde L. marina. P-UE2016-IADO. PGI-UNS- B24/234.