La estabilización de HIF1a en macrófagos humanos tratados con el líquido pleural tuberculoso promueve el control de la infección por M. tuberculosis

GENOULA, MELANIE; DUETTE, GABRIEL; MATÍAS OSTROWSKI; SASIAIN, MARIA DEL CARMEN; MARIANO MAIO; MORAÑA, EDUARDO JOSÉ; SCHIERLOH, PABLO; GEANNCARLO LUGO-VILLARINO; FRANCO, JOSÉ LUIS MARÍN; BELÉN DOLOTOWICZ; DOMINGO PALMERO; NEYROLLES, OLIVIER; BALBOA, LUCIANA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM) - 2019; 2019

La cronicidad de la tuberculosis (TB), causada por M. tuberculosis, conlleva cambios metabólicos tanto en el hospedero como en el patógeno. Siendo que las rutas metabólicas regulan la capacidad efectora de los macrófagos, éstas pueden ser blancos de estrategias de evasión inducidas por los patógenos. La activación de los macrófagos hacia el programa proinflamatorio y microbicida (perfil M1) está acompañada por un incremento en la glucólisis aeróbica en detrimento de la fosforilación oxidativa, lo cual es mediado por el factor HIF-1α. En este trabajo nos propusimos evaluar el impacto del microambiente generado durante la infección con M. tuberculosis sobre las vías metabólicas de los macrófagos M1 y sobre su actividad microbicida. Materiales y métodos. Macrófagos diferenciados a partir de monocitos humanos, fueron activados con IFN-γ/LPS (M1), y tratados o no con la fracción acelular de derrames pleurales tuberculosos (DP-TB) con el fin de modular el microambiente infeccioso local. Los DP-TB fueron colectados por médicos del Htal Muñiz mediante toracocentesis terapéutica. La producción de lactato se determinó mediante ensayos enzimáticos. Se emplearon DMOG y cloruro de cobalto como estabilizadores de HIF-1α. La expresión de HIF-1 α, de marcadores de activación y de especies reactivas del oxígeno mitocondriales se determinó mediante citometría de flujo. La respiración mitocondrial se evaluó con un microanalizador de flujo extracelular. La concentración de IL-1β se determinó mediante ELISA. La carga bacilar se estimó mediante la estimación del área ocupada por M. tuberculosis en microfotografías de macrófagos infectados obtenidas por microscopía confocal. Las comparaciones se realizaron utilizando la prueba de Friedman, seguido de las comparaciones de Dunn. Se consideró un valor de p < 0.05 como significativo.Resultados. La activación de los macrófagos con IFN-γ/LPS (M1) indujo el aumento de la expresión de CD80, CD86, HLA-DR, PD-L1 y HIF-1α; y la liberación de lactato (producto final de la glucólisis). Si bien el tratamiento con el DP-TB no alteró la adquisición del fenotipo en cuanto a la expresión de receptores de superficie evaluados; inhibió la producción de lactato y el incremento de HIF-1α. En forma paralela, la respiración mitocondrial se encontró aumentada en los macrófagos M1 tratados con el DP-TB. En línea con estos resultados, los niveles de HIF-1 α se redujeron en los macrófagos M1 tratados con el DP-TB, así como ciertos parámetros proinflamatorios como la producción mitocondrial de especies reactivas del oxígeno y de IL-1β, lo cual fue acompañado por un incremento en la carga bacilar. De forma interesante, la adición de estabilizadores de HIF-1α fue capaz de revertir los parámetros alterados en los macrófagos M1 tratados con DP-TB.Conclusiones. Demostramos que el DP-TB altera las vías metabólicas de los macrófagos M1 mediante la inhibición de HIF-1α, perjudicando el control de la infección por M. tuberculosis.