IMEX   05356
INSTITUTO DE MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN DE TOXINA SHIGA 2 MEDIADA POR CÉLULAS MIELOIDES INFECTADAS POR CEPAS DE ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRÁGICAS (EHEC)
Autor/es:
BRUBALLA, ANDREA CECILIA; PINEDA, GONZALO EZEQUIEL; FERNÁNDEZ BRANDO ROMINA J; MUÑOZ, MANUEL; SHIROMIZU, MAIUMI; BERNAL, ALAN; RAMOS MV; PALERMO, MARINA SANDRA; SABBIONE, F; BOUVIER, LEON; TREVANI, A
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019
Institución organizadora:
AAM, CAMA, CLAMME, SAMIGE
Resumen:
Las cepas enterohemorrágicas de Escherichia coli (EHEC), son patógenos transmitidos por los alimentoscapaces de colonizar el intestino de los humanos y causar síndrome urémico hemolítico(SUH). La toxinaShiga (Stx) es el factor de las EHEC, y es codificado por un bacteriófagolisogénico incorporado al DNA bacteriano. Se compone de unasubunidad A enzimáticamente activa (sub A) y una subunidad B pentamérica. Lacepa O157:H7 (O157), que expresa la variante 2 de la Stx (Stx2), es una de lascepas más asociadas a esta enfermedad. Habiendo detectadola presencia de putativos promotores eucariotas en el gen de Stx2 y sabiendoque, estas bacterias se asocian a las Placas de Peyer del intestino, nuestroobjetivo fue estudiar la interacción de la cepa O157 con macrófagos paraevaluar si es posible, en el contexto de la infección, la expresión de latoxina mediada por estas células eucariotas.Con este fin, la línea celular macrofágica humana, THP-1, fue infectadautilizando distintas cepas, a saber: i) cepa O157 aislada de paciente, ii) lamisma cepa pero sin expresión de toxina (Dstx2), iii) con la cepa no patógena C600 y iv) con unaC600 lisogenizada con el bacteriófago 933W (C600Φ933W), productor de Stx2. Se evaluó laviabilidad celular mediante ensayos de MTT y la internalización de lasbacterias mediante recuento de UFC. En los sobrenadantes (SN), se determinó lapresencia de Stx2 mediante ensayo de citotoxicidad en células VERO y de IL-1b por ELISA. A su vez, se evaluó la presencia detranscripto de sub A mediante qPCR con primersespecíficos utilizando como molde, en paralelo, cDNAs sintetizados con oligo-dT(OdT), random primers (RAN) ó en ausencia de primer como control (C).Se observó una disminución significativa de la viabilidad celular a partirde las 24h sólo en los macrófagos infectados con las bacterias capaces deexpresar Stx2 (O157:52*%, Dstx2:125%, C600: 132%, C600Φ933W:61%*;*p