ESCHERICHIA COLI ENTEROHEMORRÁGICA (EHEC): ESTUDIO DE LA EXPRESIÓN Y FUNCIONALIDAD DEL SISTEMA DE SECRECIÓN TIPO III

MONTAÑEZ CULMA, LEIDY JOHANNA; BRUBALLA, ANDREA CECILIA; MCATEER, SEAN; FERNÁNDEZ BRANDO, ROMINA JIMENA; BERNAL, ALAN; PINEDA, GONZALO EZEQUIEL; GALLY, DAVID; FUENTES, FEDERICO; RAMOS, MARIA VICTORIA; PALERMO, MARINA SANDRA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2019); 2019

AAM, CAMA, CLAMME, SAMIGE

Introduccióny objetivos: Los genes para las toxinas Shigas (Stx) estáncodificados en bacteriófagos lamboides que lisogenizan a las Escherichia colienterohemorrágicas (EHEC), constituyendo un factor determinante en el desarrollodel Síndrome Urémico Hemolítico; sin embargo, la capacidad para la formación delesiones características de attaching andeffacement (A/E) en el epitelio intestinal,  debido a la actividad del Sistema de SecreciónTipo III (T3S), establece un factor esencial en la adherencia y colonización deEHEC.  ElT3S se expresa desde la isla de patogenicidad Locus of enterocyte effacement (LEE), en donde elregulador Ler, codificado en el primer operon controla la transcripción de losdemás operones (LEE2-5).  El objetivo deeste trabajo fue evaluar el efecto que tiene in vitro e in vivo lasobreexpresión del regulador Ler del T3S en cepas EHEC.Materiales y métodos: Transformamos con un plásmido quecodifica para el regulador interno del LEE (Ler) dos cepas EHEC una productorade Stx2, aislada en humanos (125pLer) y su isogénica mutante que no expresaStx2 (ΔStx pLer). Como control usamos el mismoplásmido sin la secuencia de Ler (125pW y ΔStx pW). Analizamosla expresión de proteínas del T3S mediante SDS-PAGE y Western blot (Esp B/D), laadhesión bacteriana in vitro acélulas epiteliales intestinales (HCT-8 y Caco-2), la colonización bacteriana in vivo en un modelo murino de SUH porinoculación intragástrica de las cepas clonadas y la motilidad mediante pruebasmicrobiológicas. Resultados: Observamos un aumento en la expresión de Esp B/D en 125pLer y ΔStx pLer por SDS-PAGE y WB,además 125pLer mostró mayor adhesión a células HCT-8 y Caco-2 con respecto alas demás cepas, evidenciado también por microscopia confocal (% de adherencia±DS: HCT-8= 125pLer: 69±2; 125pW: 20±3; ΔStx pLer: 35±1; ΔStx Pw:15±1; Caco-2 = 125pLer: 49±1; 125pW: 10±1; ΔStx pLer: 36±4; ΔStx Pw:12±1; ANOVA p˂0.05). Así mismo, se encontraron diferencias en la colonizaciónentre las cepas en Materia fecal (MF) log UFC/g y en Intestino Grueso (IG),Intestino Delgado (ID) y Ciego (C) log UFC/cm  (Media±ESM) 125pLerMF: 3,3±0,4  IG: 3,7±0,3 ID: 4,2±0,3 C: 3,9±0,4;  125pW: MF: 2,3±0,4  IG: 3,2±0,3 ID: 4,3±0,3C: 3,0±0,4;  ΔStx pLer: MF: 3,7±0,3  IG: 3,7±0,4 ID: 3,5±0,6C: 3,3±0,7; ΔStx  Pw: MF: 2,1±0,4  IG: 2,7±0,5 ID: 2,9±0,5 C:3,3±0,7;  ANOVA p0.012). Igualmentese vio que 125pLer produjo mayor mortalidad en un modelo murino (% demortalidad: 125pLer: 100; 125Pw:60 Log-rank p<0.05).  Laspruebas de motilidad mostraron mayor diámetro (mm) a las 48 hs en las cepas queno tenían sobreexpresión de Ler (media±ESM: 125pLer:34±6; 125pW: 45±8; ANOVA p˂0.05; ΔStx pLer: 37±8; ΔStx Pw: 80±3; ANOVA  p˂0.05). Conclusiones: La sobreexpresión de Lerfavorece el aumento de la producción de proteínas del T3S que, por un lado, lleva a una disminución en lamotilidad y, por otro lado, a una mayoradhesión y colonización bacteriana. Todas estas observaciones en conjunto determinan unaumento en la patogenicidad in vivo.