Caracterização do estado de metilação pontual nos genes CTLA4 e CD28 em pacientes hemofílicos: ausência de associação com o desenvolvimento de anticorpos inibidores.

TEIXEIRA DE SOUZA J.; MEDINA-ACOSTA E.; FIGUEIREDO OSÓRIO DA SILVA C.; BARBOSA DE SOUZA T.; ROSSETTI L.C.

Campos dos Goytacazes (RJ)

Jornada; X Congresso Fluminense de Iniciação Científica e Tecnológica e III Congresso Fluminense de Pós-Graduação (X CONFICT).; 2018

Universidade Estadual do Norte Fluminense Darcy Ribeiro (UENF)

Caracterização do estado de metilação pontual nos genes CTLA4 e CD28 em pacientes hemofílicos: ausência de associação com o desenvolvimento de anticorpos inibidores Thiago Barbosa de Souza, Jozimara Teixeira de Souza, Cleiton Figueiredo Osório da Silva, Liliana Rossetti, Enrique Medina-AcostaIntrodução: A hemofilia A é uma coagulopatia hereditária caracterizada pela deficiência do fator VIII de coagulação. A terapia consiste em repor o fator deficiente. Alguns hemofílicos desenvolvem anticorpos inibidores reduzindo a resposta terapêutica. Alelos de SNPs no gene CTLA4 estão associados com risco de doenças autoimunes e com o desenvolvimento de inibidores, porém ainda não foram encontrados fatores epigenéticos que contribuem à variação fenotípica observada. O presente trabalho buscou avaliar o estado de metilação em CpG próximos aos SNPs de risco no gene CTLA4 e no gene CD28, à montante do CTLA4, em pacientes hemofílicos positivos (Inh+) e negativos (Inh-) para inibidores, e controles não hemofílicos. Paralelamente utilizamos uma abordagem computacional para determinar os perfis de modificações pós-traducionais de histonas em genes da resposta imune em bancos de dados públicos de imunoprecipitação da cromatina - CHIP-Seq. Objetivos: Determinar o estado de metilação em dois sítios CpG no gene CTLA4 e um sítio no gene CD28 em pacientes Inh+, Inh- e controles não hemofílicos. Determinar o perfil de enriquecimento de modificações de histonas em bancos de dados públicos de CHIP-Seq em indivíduos não hemofílicos. Metodologia: Interrogação do estado de metilação das CpGs nos genes CTLA4 e CD28 em amostras de DNA genômico de sangue periférico por ensaio de digestão enzimática sensível à metilação seguida de PCR quantitativo fluorescente. Investigação das modificações de histonas nos genes CTLA4, GATA3, IL4, IFNG, TBX21, IL8, IL6, IL1A, IL1B, IL10, CST7, FOXP3 e TNF utilizando dados públicos do NIH Roadmap Epigenomics Mapping Consortium. Resultados e Discussão: Todos os sítios CpG avaliados nos genes CTLA4 e CD28 apresentaram estado hipermetilado (>80%). Não foi encontrada diferença estatística entre os grupos avaliados (p > 0,05). Pelas análises computacionais observamos: tecidos que expressam o gene IL4 apresentam poucas marcas de histona; o gene IFNG não apresenta as marcas de repressão; algumas marcas de ativação estão enriquecidas no gene IFNG em células NK; tecidos que expressam os genes GATA3 e TBX21 apresentam marcas de ativação e repressão. Conclusão: Não encontramos diferenças significativas nos perfis epigenéticos entre os grupos.Palavras-chave: Hemofilia A, Inibidores, MetilaçãoInstituição de fomento: CNPq, FAPERJ, UENF