La vía de reparación Alt-EJ genera rearreglos cromosómicos en células humanas deficientes en ATM y DNA-PKcs tratadas con Etopósido

DE CAMPOS NEBEL M; PALMITELLI M; GONZÁLEZ CID M; DE CAMPOS NEBEL M; GONZÁLEZ CID M; PALMITELLI M

San Fernando del Valle de Catamarca

Congreso; XLVI Congreso Argentino de Genética, IV Jornada Regional NOA; 2017

Sociedad Argentina de Genética

La reparación incorrecta de las rupturas de doble cadena (RDC) por reunión de extremos alternativa (alt-EJ) genera rearreglos cromosómicos, inestabilidad genómica y tumorigénesis. La droga antitumoral Etopósido (ETO) produce RDC persistentes y está asociada al desarrollo de neoplasias secundarias. Se evaluó el rol de alt-EJ en la generación de rearreglos cromosómicos inducidos por ETO en células humanas deficientes en ATM y DNA-PKcs. Las células HeLa ATMkd y su control no-silenciante NS se trataron con ETO 2µg/ml por 1-2hs en presencia o no del inhibidor químico de DNA-PKcs NU7026 10µM. Estos tratamientos provocaron que 84,6-90,7% de las células ATMkd y NS mostraran señal γH2AX (marcador de RDC) en la fase G2 a tiempo 0. A las 10hs postratamiento (PT), mientras que el daño (focos γH2AX por inmunomarcación) en NS y ATMkd tratadas con ETO y NS con NU7026-ETO fue de 39,3±4%; 66,3±3,6% y 60±5,6%, respectivamente, ATMkd tratadas con NU7026-ETO exhibieron niveles altos (83,6±2,4%). La reparación errónea de las RDC generó cromosomas dicéntricos a las 28hs PT, siendo esa frecuencia en ATMkd tratadas con NU7026-ETO 2,3 veces mayor que en NS. A los 6 días PT, la inhibición de DNA-PKcs en ATMkd tratadas con ETO aumentó 18 veces los rearreglos cromosómicos (fusiones teloméricas y cromatídicas y dicéntricos) en relación a NS. A su vez, la inhibición de alt-EJ suprimió la formación de rearreglos en ambas líneas celulares. Estos resultados indican que en un contexto deficiente en ATM y DNA-PKcs, la vía de reparación alt-EJ genera rearreglos persistentes frente a las RDC inducidas por ETO.