Hemofilia: Algoritmos moleculares en hemofilia A y B.

ROSSETTI L.C.

CABA

Simposio; 72º Congreso Argentino de Bioquímica; 2017

Asociación Bioquímica Argentina (ABA)

TÍTULO DE LA PRESENTACIÓN: Hemofilia: Algoritmos moleculares en hemofilia A y B APELLIDO, NOMBRE: Rossetti, LilianaLUGAR DE TRABAJO: Lab. Genética Molecular de la Hemofilia. Instituto de Medicina Experimental/CONICET- Academia Nacional de Medicina.La hemofilia es una coagulopatía hereditaria, ligada al cromosoma X, que afecta a 1 cada 5.000 varones en todas las poblaciones humanas. Puede clasificarse en hemofilia A (HA) debida a mutaciones deletéreas en el gen del factor VIII de coagulación (F8)(Xq28) y hemofilia B (HB) asociada al factor IX (F9)(Xq27.1). La HA se presenta con una frecuencia 5 veces mayor que la HB, y puede sub-clasificarse en severa (se) (FVIII:C/FIX:C < 1UI/dl) y moderada/leve (1UI/dl < FVIII:C/FIX:C < 20UI/dl).Nuestro Laboratorio de Genética Molecular en Hemofilia (GMH) es único en el país y pionero en Latinoamérica, y sus objetivos permanentes son investigar los mecanismos involucrados en la relación genotipo-fenotipo en Hemofilia y proveer de un esquema óptimo de análisis del F8 y F9 mediante el desarrollo de nuevos abordajes de análisis del genoma humano. Debido al gran tamaño (187kb) y complejidad (26 exones) del F8 la caracterización de la mutación causal de HA aún constituye un desafío experimental de magnitud. La inversión del intrón 22 (Inv22) y del intrón 1 (Inv1) son las únicas mutaciones recurrentes en hemofilia y causan aproximadamente la mitad de las HA severas en todo el mundo sin diferencias étnico-geográficas (42-44%, y 2-5%, respectivamente). El resto de los casos de HA y HB involucran todo tipo de mutaciones incluyendo grandes y pequeñas deleciones o inserciones, y mutaciones puntuales asociadas a defectos tipo missense, nonsense y del splicing. Por sobre el análisis indirecto por ligamiento familiar, la caracterización de la mutación causal es hoy la ruta preferida para obtener información segura para asesorar a las familias con hemofilia (diagnóstico de portadoras y prenatal). Nuestro grupo de GMH ha diseñado y optimizado un algoritmo de diagnóstico molecular de análisis completo del F8 y F9. Este esquema incluye el desarrollo de un abordaje original para el análisis de las inversiones recurrentes en seHA -Inv1 e Inv22 (tipo 1/2, y eventuales duplicaciones y deleciones)- denominado inverse shifting-PCR (IS-PCR). El esquema también incluye la amplificación del F8 (o F9) para detección y análisis de grandes deleciones por PCR de larga distancia y/o medición de dosis génica por QRT-PCR, el screening de pequeñas mutaciones por CSGE (conformation sensitive gel electrophoresis), y secuenciación automática-fluorescente.La elucidación e incorporación de toda la información genética relevante para el paciente con hemofilia y su familia, permiten diseñar un régimen de tratamiento individualizado y la mejor terapia y seguimiento de manera costo-efectiva para el sistema de salud.