Identificação de regiões diferencialmente metiladas entre indivíduos hemofílicos e não hemofílicos: associação com o desenvolvimento de anticorpos inibidores

ROSSETTI LC; BARBOSA DE SOUZA T; MEDINA-ACOSTA E; DE BRASI CD

Campos de Gotacayzes

Congreso; IX Congreso Fluminense de Iniciación Científica, II Congreso Fluminense de Post-Graduados.; 2017

Introdução: Ahemofilia A é uma coagulopatia caracterizada pela deficiência do fator VIII. Resultaem sangramentos espontâneos ou de maior intensidade em procedimentos cirúrgicose traumas. A terapia consiste em repor por infusão intravenosa o fator VIII. Umhemofílico pode desenvolver anticorpos, denominados de inibidores, que reduzema eficácia terapêutica, o que encarece o tratamento. Diversos fatores genéticose não genéticos têm sido associados ao desenvolvimento de inibidores. Nenhumestudo descreveu ainda influências epigenéticas associadas ao desenvolvimentode inibidores. Este trabalho tem como proposta interrogar o estado de metilaçãopontual em genes da resposta imune em indivíduos hemofílicos e não hemofílicospara identificar marcas epigenéticas associadas ao desenvolvimento deinibidores. Objetivo: Determinar oestado de metilação em 10 sítios CpG selecionados nos genes IL1B, IL2, IL4, IL6, IL10,CST7, TNF e IFNG em indivíduos argentinossendo hemofílicos positivos para inibidores (Inh+), hemofílicos negativos (Inh-)ou controles não hemofílicos (CNH). Metodologia: Interrogação do estado demetilação pontual em sítios CpG nos genes alvo por ensaio de digestãoenzimática sensível à metilação seguida de PCR quantitativa por fluorescênciaem 10 hemofílicos (Inh+), 10hemofílicos (Inh-) e 10 indivíduos CNH. Resultados e Discussão: Dos 10 sítios CpGs alvo, três (IFNG, IL4 alvo 2 e IL4 alvo 3)apresentaram estado de hipermetilação (próximo a 100%). Outros três sítios CpG (IL2, IL1B e TNF) apresentaram estado de hipometilação (próximo a 0%). Quatrodemais sítios (IL4 CpG alvo 1, IL10, CST7 e IL6) apresentaramestado intermediário de metilação (próximo a 50%). As diferenças dos estados demetilação pontual foram estatisticamente significativas (P < 0,05) entre os grupos: CNHx Inh(+) para os sítios CpG alvo 1 e3 do gene IL4 e IL6, respectivamente, e CNHx Inh(-) no sitio CpG no gene CST7. Contudo, a variação observada nosperfis de metilação entre os grupos Inh(+)e Inh(-) não foi significativa. Conclusão: Foram identificadasdiferenças probabilisticamente significativas na marca epigenética de metilaçãode DNA em sítios CpG exclusivamente entre os grupos de indivíduos hemofílicos enão hemofílicos independentemente da ocorrência de inibidores.