Análisis de mutaciones del gen TP53 en leucemia linfocítica crónica. Su relación con las características citogenéticas, citomoleculares y moleculares de los pacientes

RAQUEL PALOMO; IRMA SLAVUTSKY; CARMEN STANGANELLI; FLAVIA STELLA; VIRGINIA PALAU NAGORE

Mar del Plata

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Hematología; 2017

Sociedad Argentina de Hematología

Objetivo: El gen supresor tumoral TP53 (tumor protein P53) (17p13) es un factor de transcripción que regula la expresión de múltiples genes relacionados con diferentes funciones celulares. En leucemia linfocítica crónica (LLC), las deleciones de TP53 se asocian a muy corta sobrevida y resistencia al tratamiento. Las mismas se encuentran acompañadas de mutaciones en el alelo restante, aunque también pueden hallarse en ausencia de deleción. El objetivo de este estudio fue evaluar la presencia de mutaciones de TP53 en pacientes con LLC portadores de deleción de dicho gen, tendiente a analizar la frecuencia y tipo de mutación presente en nuestros de pacientes.Materiales y Métodos: Se analizaron 20 pacientes con LLC con deleción de 17p13 (11 varones; edad media: 66,3 años, rango: 48-80 años; estadios Rai: 0: 25%, I-II: 37,5% y III-IV: 37,5). Se realizó cultivo de linfocitos de sangre periférica (SP) con estimulación mitogénica y análisis por FISH empleando la sonda OLE 17p13.1 TP53. (LiVE-LEXEL, Buenos Aires, Argentina). Se efectuó extracción de DNA para análisis de TP53 y de RNA para evaluación de IGHV (immunoglobulin heavy variable region), a partir de células mononucleares de SP. Para TP53, se efectuaron cuatro reacciones de PCR con primers que amplifican los exones 4 a 9 y los límites intron-exón, seguido de secuenciación bidireccional. Los resultados se compararon con bases públicas: IARC TP53 Mutation Database (Versión R18) y UMD TP53 curated 2012 R1 Database. Para IGHV se emplearon primers sentido específicos para las familias VH1-VH7 y consenso antisentido JH o Cµ, seguido de secuenciación y análisis con las bases de datos IMGT/V-QUEST e IgBlast. Se consideraron como no mutadas (NM) las secuencias con una homología ≥ 98% respecto de la línea germinal. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Institución. Todos los individuos proporcionaron su consentimiento informado.Resultados: Se encontraron 7 (35%) casos con TP53 mutado (TP53-M) (Tabla): 1 en el exón 4 (14%), 3 en el exón 5 (44%), 1 en el exón 6 (14%) y 2 en el exón 8 (28%). Se observaron 2 insersiones y 1 deleción en el codón 209, todas con cambio del marco de lectura, y 4 mutaciones puntuales con cambio de sentido: 3 transiciones y 1 transversión. El análisis del polimorfismo del codón 72 (rs1042522) que codifica arginina (72Arg, genotipo CGC) o prolina (72Pro, genotipo CCC), mostró el genotipo Pro/Pro, asociado a mayor incidencia de mutaciones en TP53, en 5 pacientes, 4 de ellos con el gen mutado. El análisis por FISH mostró clones superiores al 20% de las células (20,3%-88%) en todos los casos con TP53-M. Seis pacientes (85,7%) con TP53-M mostraron alteraciones estructurales en su cariotipo. En 16 casos se efectuó el análisis de IGHV, siendo NM en 10 (63%), 4 de los cuales presentaron mutación de TP53 (Tabla). Conclusión: A nuestro conocimiento, estos datos constituyen la primera evaluación de mutaciones de TP53 en pacientes con LLC de nuestro país, e indican la importancia de su estudio, tendiente a una mejor caracterización biológica y clínica de la patología.