IMEX   05356
INSTITUTO DE MEDICINA EXPERIMENTAL
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de inclusiones intracitoplasmáticas en Leucemia Linfática Crónica. Posibles de mecanismos de formación
Autor/es:
CARMEN STANGANELLI; DARÍO SASTRE; IRMA SLAVUTSKY; CECILIA RODRÍGUEZ; DANIELA ARROYO; PABLO IRIBARREN; CLAUDIO BUSSI; VIVIANA HELLER
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; XXIII Congreso Argentino de Hematología; 2017
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Hematología
Resumen:
Introducción: La presencia de inclusiones citoplasmáticas es un evento poco común en desórdenes linfoproliferativos. Su incidencia en leucemia linfocítica crónica (LLC) varía entre 3 y 18%. Estas inclusiones pueden presentar diferentes características morfológicas (vacuolas, cristales, bastones), encontrándose localizadas principalmente a nivel del retículo endoplásmico rugoso (RER). La mayoría de los pacientes reportados indican que las mismas representan depósitos de inmunoglobulinas (Igs), no habiéndose evaluado en ningún caso los rearreglos de IGHV (immunoglobulin heavy chain variable region). Al presente no se conoce con exactitud el mecanismo de formación de dichas inclusiones. En este trabajo se presenta el análisis morfológico, inmunofenotípico, ultraestructural y de co-localización proteica de las inclusiones citoplasmáticas observadas en un paciente con diagnóstico de LLC, y su relación con el rearreglo IGHV, con el fin de poder avanzar en el conocimiento de la composición y el mecanismo de origen de las mismas.Materiales y métodos: Se analizaron las inclusiones citoplasmáticas presentes en los linfocitos de una mujer con diagnóstico de LLC de 9 años de evolución. Se efectuó estudio mediante May-Grünwald-Giemsa (MGG), microscopía electrónica (ME) y microscopía confocal (MC), empleando los anticuerpos anti-IgM, anti-cadenas livianas y LAMP-1 (anti-lysosomal associated membrane protein 1). Se realizó cultivo de linfocitos de sangre periférica (SP) con estimulación mitogénica para análisis cromosómico y FISH con el panel de sondas de LLC. Se efectuó extracción de ARN de células mononucleares de SP, empleando primers sentido específico para las familias VH1-VH7 y consenso antisentido JH o Cµ. Se realizó secuenciación de los productos de PCR, utilizando las bases de datos IMGT/V-QUEST e IgBlast para su análisis. El estudio fue aprobado por los Comité de Ética Institucionales. La paciente proporcionó su consentimiento informado.Resultados: El análisis por citometría de flujo al diagnóstico presentó el siguiente perfil inmunofenotípico: positivo para CD19, CD20débil, CD5, CD200, CD22débil, CD79bdébil e IgM, y negativo para CD23, CD10, CD103 y CD11c, con restricción para la cadena liviana lambda (IgL) de baja intensidad. ZAP-70 positivo (63%), CD38 y CD49d negativos. En la progresión, se observó positivización de CD38 (74%) y la presencia de una pequeña población B (5% de los linfocitos B) con igual inmunofenotipo pero mayor intensidad de IgL de superficie, coexistiendo con el clon original. El análisis citogenético mostró un cariotipo normal: 46XX, en tanto que por FISH presentó trisomía 12 (7,4%) y deleción 13q14 (11,3%). En el extendido de SP se observó la presencia de inclusiones cristalinas en el 60% de las células linfoides. El análisis ultraestructural mediante ME mostró 2 o más estructuras electrodensas, rectangulares o romboidales y alta densidad de ribosomas en el citoplasma, no siendo posible identificar la presencia de RER u otro tipo de membrana alrededor de los cristales. Por MC se observó que las inclusiones contenían IgM y cadena liviana lambda, y ambos marcadores presentaron alto índice de co-localización con LAMP-1, sugiriendo una ubicación lisosomal de las mismas, no descripta previamente en LLC. El análisis de IGVH mostró dos rearreglos, uno no productivo comprendiendo los segmentos IGHV3-13*03, IGHD4-23*01 e IGHJ4*02, con un codón stop y ausencia de IMGT 2nd-Cys 104,y otro productivo IGHV3-48*03, IGHD3-10*01 e IGHJ1*01, responsable de la expresión en superficie. Ambos fueron mutados con 85,7% y 94,4% de homología con la línea germinal.Conclusiones: Estos hallazgos demuestran por primera vez la asociación entre los precipitados de IgM-λ y lisosomas, así como el tipo de rearreglo IGHV involucrado, aportando nueva información sobre las características de las inclusiones intracitoplasmáticas en LLC.