Cepas de M. tuberculosis multiresistente a drogas promueven la secreción de factores solubles por el epitelio bronquial humano alterando las funciones efectoras de polimorfonucleares

LEONARDO RIVADENEYRA; BEATRIZ LÓPEZ ; MARIA DEL CARMEN SASIAIN ; DENISE KVIATCOVSKY; CELINE COUGOULE ; ISABELLE MARIDONNEAU-PARINI ; SILVIA DE LA BARRERA ; LUCIANA BALBOA; MELANIE GENOULA ; MIRTA SCHATTNER

Rosario, Santa Fe

Congreso; Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis; 2016

Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y otras Micobacteriosis

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infecta el pulmón interactuando con el epitelio respiratorio el cual no solo constituye una barrera anatómica frente a la invasión bacteriana sino que también gatilla una respuesta inflamatoria con el fin de controlar la infección. Esta respuesta se caracteriza por la producción de moléculas antimicrobianas, citoquinas proinflamatorias y quemoquinas y el reclutamiento de macrófagos y células polimorfonucleares (PMN). Además, las metaloproteinasas (MMP) desempeñan un rol importante en la inducción de la destrucción tisular mediada por Mtb e incrementan el reclutamiento de células inmunes al sitio de infección contribuyendo a la formación del granuloma y, por lo tanto, al control de la expansión bacteriana. En este trabajo evaluamos si diferentes cepas de Mtb promueven la secreción diferencial de factores pro/antiinflamatorios que podrían modificar/alterar las funciones de los PMN.Métodos: La línea celular del epitelio bronquial humano Calu-6 fue infectada con las cepas multirresistentes a drogas M y Ra o con H37Rv a una multiplicidad de infección de 5 por 2h y se colectaron los sobrenadantes (SN) 18h post-infección. Los niveles de IL-8, TNF-α, IL-6, IL-10, IL1-β y TGF-β fueron evaluados por ELISA y la actividad MMP por zimografía en gelatina. El efecto sobre los PMN fue estudiado incubándolos con dichos SN por 1.30h o 3hs dependiendo del experimento. Luego se determinó la actividad quemoatractante frente a péptidos formilados (fMLP) mediante cámara de Boyden, la generación de especies reactivas del oxígeno (EROs) y la expresión de los receptores CD11b y CD16 mediante citometría de flujo. Resultados: 1) Los resultados de ELISA mostraron que los niveles de IL-6, IL-10 e IL-1β en los SN fueron indetectables mientras que se detectaron bajos niveles de IL-8 y altos de TGF-β sin observarse diferencias entre cepas. Por otro lado, la producción TNF-α sí mostró secretarse diferencialmente entre cepas siendo M la menor inductora. 2) Los SN no difieren respecto a la actividad MMP-2/-9 entre cepas 3) El SN derivado de Calu-6 infectada con M indujo un mayor número de PMN migrados frente a fMLP 4) Los SN de Calu-6 infectadas o no con H37Rv indujeron la activación de los PMNs, ya que aumentaron la expresión de CD11b y CD16 e incrementaron la producción de EROs inducida por PMA. Ambos efectos fueron revertidos cuando se utilizaron los SN de M.Conclusión: Las distintas cepas de Mtb inducen similar actividad MMP sugiriendo que tendrían la misma capacidad para destruir el epitelio. Aunque los PMN son capaces de migrar y llegar al sitio de infección, la baja producción de TNF-α detectada en los SN de Calu-6 infectada con M representaría un posible mecanismo de evasión para evitar la activación del epitelio pulmonar y, además, se asociarían con una menor activación de los PMNs.