EL POLIMORFISMO CTLA4 P.THR17ALA (C.49A>G) SE ASOCIA CON EL DESARROLLO DE INHIBIDOR EN PACIENTES ARGENTINOS CON HEMOFILIA A SEVERA

RADIC CP; NEME D; DE BRASI CD; ABELLEYRO MM; CANDELA M; ROSSETTI LC; MARCHIONE VD; PRIMIANI L; DE TEZANOS PINTO M

Ciudad Autonma De Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis; 2016

Sociedad Internacional de Hemostasia y Trombosis

AntecedentesLa recombinación genética es un proceso fundamental sobre el cuál descansa la generación de diversidad de los seres vivos. Además de la segregación de cromosomas homólogos, la meiosis produce nuevos haplotipos por medio de un fenómeno clave de la reproducción sexual, el crossing over (CO). Normalmente, el evento de CO ocurre entre secuencias homólogas, equivalentes (iguales o alélicas) pertenecientes a cromosomas homólogos, con la singular excepción de los eventos de CO asociados a los cromosomas X e Y, sobre las regiones pseudo-autosómicas en meiosis masculinas. Sin embargo, ocasionalmente, han sido observados eventos de recombinación entre secuencias no homologas u homólogas, intra o intercromosómicas a menudo causando la interrupción de la secuencia normal de genes y resultando así en enfermedades genéticas. La hemofilia es una coagulopatía hereditaria, ligada al cromosoma X, que afecta a 1-2 de cada 10.000 varones en todas las poblaciones humanas. La hemofilia se clasifica en dos tipos indistinguibles clínicamente, la hemofilia A (HA) debida a mutaciones deletéreas en el gen del factor FVIII de coagulación (F8) y hemofilia B (HB), con mutaciones en el gen del FIX (F9) (revisión en De Brasi et al, 2001). Desde el clonado y caracterización del F8 y F9 un número creciente de laboratorios han caracterizado y reportado un heterogéneo espectro de mutaciones causales de hemofilia en las distintas poblaciones del mundo. Particularmente, dos grandes inversiones recurrentes afectan al F8, la inversión del intrón 22 (Inv22) (Naylor et al, 1993; Lakich et al, 1993) que afecta al 42% de las HA severas en series Internacionales y Argentinas (Antonarakis et al, 2005; De Brasi et al, 2000) y la inversión del intrón 1 (Inv1), 5% de las HA severas (Bagnall et al, 2002). Ambas inversiones ocurren por recombinación homóloga no-alélica entre secuencias repetidas e invertidas. En la Inv22, entre una secuencia de 9,5kb ubicada en el intrón 22 del F8 (int22h-1) (Naylor et al, 1995) y una de dos copias de int22h ubicada más cerca del telómero Xq (int22h-3 o int22h-2) y orientada inversamente respecto a int22h-1 (revisión en De Brasi y Bowen, 2008). Dependiendo de la copia de int22h extragénica involucrada en el evento de recombinación que resulta en la inversión que trunca al F8, la Inv22 se clasifica como de tipo I (Inv22-1) si la recombinación involucra a int22h-3, patrón observado en aproximadamente el 80% del total de Inv22s, o alternativamente, la inversión del tipo II (Inv22-2), si involucra a int22h-2, en el 20% restante. La Inv1 es originada por recombinación homóloga entre secuencias de 1kb, presentes en el intrón 1 del F8 (int1h-1) y aproximadamente 300kb río arriba del F8 y en orientación opuesta, int1h-2 (Bagnall et al, 2002).Otros grandes rearreglos genómicos importantes en hemofilia son las deleciones, definidas como pérdidas de más de 100bp aunque en la práctica se trata de deleciones de uno o más exones completos. Estas grandes deleciones parciales o totales del F8 o F9 determinan la causa de aproximadamente 10% de las HA severas (Rossetti et al, 2007) y 5% de las HB severas (Radic et al, 2013). La detección de estas grandes deleciones ligadas al X para su caracterización molecular o mecanística o para su eventual detección heterocigota para diagnóstico de portadoras, puede ser abordada en la práctica por obtención de una señal específica de la mutación (e.g., por LD-PCR, long distance-PCR) distinta de la señal referencia no mutada.Aunque no inexplorada, esta área de investigación observó escasos esfuerzos para describir un panorama completo. Entre estos esfuerzos, Wood-Samuels et al (1989) aislaron y caracterizaron las rupturas de un número pequeño de grandes deleciones del F8 y estimaron que el mecanismo involucrado en esos casos era el de recombinación no homóloga. Trabajos posteriores que caracterizaron grandes deleciones parciales del F8 describen mecanismos tanto de recombinación homóloga entre retrotransposones tipo SINE (short interspersed nuclear elements) como Alu, y segmentos parciales de LINE (long interspersed nuclear elements) (Van der Water et al, 1998; Vidal et al, 2002; Rossetti et al, 2004b). Finalmente mecanismos asociados a la síntesis del ADN permiten explicar alguno de los rearreglos complejos descriptos en hemofilia, Break-Induced Replication (BIR) (Constantino et al, 2014), Microhomology-Mediated Break-Induced Replication (MMBIR) (Hasting et al, 2009) y Fork Stalling and Template Switching (FoSTeS) (Lee et al, 2007), a menudo requiriendo la estabilización de las cadenas de ADN involucradas en la deleción o el rearreglo complejo mediante interacción de elementos repetitivos ubicados en la región genómica (i.e., Sinapsis Ectópica) (Liu et al, 2011).