Las células estromales de ganglios linfoides aumentan la sobrevida in vitro de linfocitos T y B

GABRIELA CAMICIA; DANIELA LORENZO; NOEL BADANO; ANDREA MAGLIOCO; NADEZDA SIACHOQUE; GABRIEL CABRERA; ISABEL PIAZZON; IRENE NEPOMNASCHY

Mar del plata, Argentina

Congreso; LIII Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión científica de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2008

SAIC-SAFIS

SAIC 2008  Los ratones mutantes para catepsina L (nkt) presentan altos números de linfocitos en los ganglios linfoides (GL) que correlacionan con aumentos en los niveles de glicoproteínas de la matriz extracelular (ECM) (Lombardi y col, JImmunol. 174:7022, 2005). Con el objeto de investigar la influencia del estroma de los GL en las poblaciones linfocitarias, seleccionamos  células estromales (CE) -principales productoras de ECM- por cultivo a largo plazo de células adherentes de GL de ratones nkt (CEnkt) y wt (CEwt) (pasaje 11). La ausencia de marcadores de linaje endotelial, macrofágico y dendrítico (FACS), la morfología fibroblástica y la expresión de mRNA para gp38 (RT-PCR) sugieren la obtención de fibroblastos reticulares. Evaluamos la influencia de las CE en la sobrevida y proliferación linfocitaria in vitro cocultivando linfocitos de GL de ratones wt en presencia o ausencia de CE wt y nkt. Determinamos los porcentajes de apoptosis y proliferación por marcación con ioduro de propidio y análisis por FACS a 1, 2, 3 y 7 días de cocultivo. Aunque no se observaron diferencias en los porcentajes de proliferación, la presencia de CE disminuyó el porcentaje de apoptosis de células CD4+ y B220+, siendo mayor el efecto de las CEnkt. Ej. día 2 (media % hipodiploidía ±DS; n=3) células CD4+: CEnkt: 0,19±0,02; CEwt: 2,42±0,7; sinCE: 13,3±1,5; CEnkt vs sinCE y CEwt vs sinCE p<0,005; CEnkt vs CEwt p<0,05. En células B220+: CEnkt: 2,08±0,03; CEwt: 19,9±6,1; sin CE: 73,5±4,7; CEnkt vs sinCE p<0,005; CEwt vs sinCE y CEwt vs CEnkt p<0,05. Ensayos de RT-PCR mostraron expresión de mRNA para IL-7 en las CE. El medio condicionado de CE disminuyó el porcentaje de apoptosis, aunque en menor proporción que las CE, siendo el efecto del medio condicionado de CEnkt mayor que el del CEwt. Conclusión: las CE de GL incrementan la viabilidad de linfocitos TCD4+ y B220+ in vitro, efecto que estaría mediado en parte por factores solubles cuya síntesis y/o concentración estaría incrementada en las CEnkt.